基因芯片技术筛选人不同发育阶段表皮干细胞差异表达基因研究.pdfVIP

·26· ·再生医学· 基因芯片技术筛选人不同发育阶段表皮 于细胞差异表达基因的研究 蓝蔚 刘德伍 李国辉 毛远桂 陈桦 易先锋 王联群 彭燕 钟清玲 【摘要】 目的分析人不同发育阶段表皮干细胞基因表达变化特征，探讨其可能的生物学意 义。 方法 收集胎龄28～32周胎儿、4一12岁少儿、35—55岁成人3组正常皮肤组织标本，每组10 例。采用胰蛋白酶和乙二胺四乙酸联合消化法分离表皮，Ⅳ型胶原快速黏附法分离、纯化表皮干细 胞，免疫细胞化学染色法行整合素B．、角蛋白19单克隆抗体检测鉴定。TrizoI一步法分别提取各组 细胞总RNA，琼脂糖甲醛变性凝胶电泳质检。制备探针并与表达谱芯片进行杂交，扫描芯片荧光信 号图像。对芯片图像进行分析，以2倍差异表达值筛选差异表达基因。选择明显上调或下调的基因， 用实时RT—PcR技术进一步验证相关基因。结果 与少儿组比较，成人组差异表达基因1808个， 其中上调的基因1089个、下调的基因719个，已知基因1462个、未知基因346个。少儿组样本与胎 儿组比较，差异表达基因4534个，其中上调的基因1783个、下调的基因2751个，已知基因3577个、 未知基因957个。根据基因功能分类，成人组与少儿组差异表达基因可分为128类，少儿组与胎儿组 差异表达基因可分为216类。1104个基因在胎儿组、少儿组与成人组样本中呈持续差异表达，根据 基冈功能分为32类。实验检测到持续差异表达基因中，有94个差异表达基因呈持续上调状，75个 差异表达基因呈持续下调趋势。实时RT—PCR验证结果与芯片筛选结果一致。结论 体外培养的 胎儿、少儿与成人表皮干细胞基因表达谱有明显不同，其差异可能与不同发育阶段人表皮干细胞的增 殖分化能力及皮肤创伤修复能力不同密切相关。 【关键词】 表皮； 干细胞；基因；芯片分析技术；发育 ofdi仃erentiaI ofhumanskin stemceUsatd州krent Screening express沁ngenes epidermal deveIop- ment cDNA stagesby micr蚰rraytechnique“Ⅳ肌i，L，∥De一埘Ⅱ，“Guo-^“，朋rAD地d，l—gui，CHEⅣ Y8n．zHoNG Reh口b让tta· Huo．Y|x缸n0毫ng，WANGLinn—qun．PENG Qtng—ttng．DePnrtment可8urT谌arm f如，l，CⅡ口，wdo，lgPrD口inciof矸I彘蛳，)，Re|Iln6iZit口￡幻，l^bs_Pi￡Df。C“口，I舻^o“5，D970，C^i，ln Co门-espo几di，lg口Ⅱt^or：L，UDe．埘“，33DOD6，Em口“：de埘“fi“@J26．com，7’eZ：D79J古692539 ofhuman To chamcteristicsskin 8temcellat 【Abstract】Objectivean8lyzeexpression epidemal diffbI℃nt to its MethodsHealthskin developmentalstages，andexplorebiologicalsignificance． samples f而m28-32w 35-55 feluses(F ychjldren(C yaduJl(A harvesled， group)，4一】2 group)，and group)were withlOcasesineach were and human group．Epidemis8epa