保健食品中α-亚麻酸甲酯、二十碳五烯酸甲酯、二十二碳五烯酸甲酯和二十二碳六烯酸甲酯含量测定.docVIP

前 言 本标准为首次发布。 食品安全国家标准 保健食品中α-亚麻酸本标准规定了α-亚麻酸EPA甲酯，下同）、PA甲酯，下同）和二十二碳六烯酸甲酯（简称DHA甲酯，下同）的气相色谱法。 本标准适用于α-亚麻酸EPA甲酯、DPA、DHA含量的测定α-亚麻酸EPA甲酯、DPA、DHA含量的测定 原理 样品经酸水解后提取脂肪，其中α-亚麻酸EPA）、DPA）、DHA）经酯交换生成甲酯后，通过气相色谱分离检测，以保留时间定性，外标法定量。氢氧化钾（KOH）盐酸（HCl）无水乙醚（C2H5OC2H5）乙醇（CH3CH2OH）：体积分数≥95％石油醚：沸程30℃～60℃正己烷（CH3(CH2)2CH3）：甲醇（CH3OH）：。（Na2SO4）（0.5 mol/L）2.8 g氢氧化钾，用甲醇溶解并定容至100 mL，混匀。 3.3　标准品 3.3.1　 α-亚麻酸(C18:3)甲酯≥99.0％ EPA(C20:5n3)甲酯，纯度≥98.5％ 3.3.3　 DPA(C22:5n3)甲酯，纯度≥98.0％。 3.3.4 DHA(C22:6n3)甲酯≥98.5％脂肪酸甲酯标准储备液：浓度分别为4.0 mg/mL。准确称取100.0 mg α-亚麻酸甲酯、EPA 甲酯、DPA甲酯、DHA甲酯标准物质于25.0 mL容量瓶中，用正己烷溶解并定容至刻度，摇匀。此溶液应贮存于-18℃冰箱中。 脂肪酸甲酯混合标准中间液：浓度分别为1.0 mg/mL。分别吸取脂肪酸甲酯标准储备液2.50 mL于10.0 mL容量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀。亦为标准曲线最高浓度；临用时配制。 脂肪酸甲酯标准工作液：分别吸取脂肪酸甲酯中间液 0.40 mL、0.80 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL于10.0 mL容量瓶中，用正己烷定容。此浓度即为 0 mg/mL、0.040mg/mL、0.080 mg/mL、0.10 mg/mL、0.20 mg/mL、0.40 mg/mL、1.0 mg/mL的标准工作液，临用时配制。 　气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（FID）。 　天平：感量为1 mg和0.1 mg。 　旋转蒸发仪。 　离心机：转速≥4000 r/min。 　旋涡混合器。 　恒温水浴锅。 准确称取已粉碎混合均匀的待测试样0.500 g～2.000 g（含待测组分约5 mg/g～10 mg/g）加入50 mL比色管中，加8 mL水，混匀后再加10 mL盐酸。将试管放入70℃～80℃水浴中，每隔5 min～10 min以漩涡混合器混合一次，至试样水解完全为止，约需40 min～50 min。取出试管，加入10 mL乙醇，混合。冷却至室温后将混合物移入100 mL具塞量筒中，以25 mL无水乙醚分次洗试管，一并倒入量筒中。密塞振摇1 min。加入25 mL石油醚，密塞振摇1 min，静置、分层，将有机层经过无水硫酸钠（约5 g）滤入浓缩瓶中。再加入25 mL无水乙醚密塞振摇1 min，25 mL石油醚，密塞振摇1 min，静置、分层，将有机层经过无水硫酸钠（约5g）滤入浓缩瓶中，按“再加入15 mL无水乙醚……, 静置、分层、过无水硫酸钠”，将全部提取液用旋转蒸发仪于45℃减压浓缩至有机溶剂挥发完毕。用正己烷少量多次溶解浓缩物，转移至25 ml容量瓶并定容，按5.1.2步骤甲酯化处理。 油类制品准确称取混合均匀的油类制品0.200 g～1.000 g（含待测组分约10 mg/g～20 mg/g。）至25 mL容量瓶中，加入5 mL正己烷轻摇溶解，并用正己烷定容至刻度，按5.1.2步骤甲酯化处理。 甲酯化 吸取待测液（5.1.1.1，5.1.1.2）2.0 mL至10 mL具塞刻度试管中，加入2.0 mL氢氧化钾甲醇溶液，立即移至漩涡混合器上振荡混合5 min，静置5 min，加入6 mL蒸馏水，上下振摇0.5 min，静置分层（若有机相有乳化现象，以4000转/分钟离心10分钟），吸取正己烷层待上机测试用。 注2：如使用塑料离心管或塑料刻度试管进行试样处理须同步进行空白对照试验。 色谱柱: 键合/交联聚乙二醇固定相，30 m×0.32 mm, 0.5 μm或同等性能的色谱柱。 5.2.1.2 柱温升温程序：起始温度180 ℃，10 ℃/min升温至220 ℃，再以8 ℃/min升温至250 ℃，保持13 min。 5.2.1.3 进样口：温度250 ℃；进样量1 μL，分流进样，分流比1∶20。 5.2.1.4 检测器：氢火焰离子化检测器（FID），温度270℃。 5.2.1.5 载气：高纯氮气，流量1.0 mL/min，尾吹25 mL/min。 5.2.1.6 氢气：40 mL/min；空气450 mL/min。 分别吸取1 μL的标