白细胞介素-2的诱生及生物活性wq.pptVIP

IL-2的诱生及生物活性测定 原理 IL-2可促进T细胞活化增殖 IL-2能维持IL-2依赖细胞株(CTLL-2)的代谢和存活,促进这类细胞的增殖 3H-TdR掺入法(增殖) MTT比色法(代谢) 方法 小鼠脾细胞IL-2的诱生 无菌取C57BL/6小鼠脾细胞 洗涤后调整浓度为l×107/ml 加入24孔培养板, 1ml/孔 加ConA至终浓度为3~5μg/ml 37℃，5%CO2条件下培养18-24h 离心取上清, 过滤, -20℃冻存(IL-2待检品) IL-2的生物活性测定 种板(96孔板) ： CTLL-2细胞(1×l05/ml) 100μl/孔，共24孔 加样： IL-2标准品： 原液，1:2 ，1:4，1:8，1:16 IL-2待检品： 原液，1:2，1:4，1:8，1:16 空白对照 ： RPMI1640，PBS 100μl/孔，各2复孔，共24孔 检测： 37℃，5%CO2 培养24h 加入5mg/ml的MTT, 20μl/孔 37℃, 5%CO2培养4-6h 离心, 弃部分上清，l00μl/孔 加入DMSO，100μl/孔, 吹打溶解10 min 酶联免疫吸附测定仪检测570nm的OD值 实际OD值：实验各复孔OD值-空白对照孔OD值 100% OD值: IL-2标准品实际最大OD值 50%OD值对应的标准品稀释度(S )及待测品稀释度(A) 待测品