生防萎缩芽孢杆菌CAB-1菌株几丁质酶基因的克隆和原核表达.pdf

摘要 随着植物病原菌抗药性和农药残留等问题的日益突出，利用微生物杀菌剂防治 植物病害已成为研究热点之一。几丁质酶能够有效降解高等真菌细胞壁中的几丁质 成分，从而抑制或杀死多种植物病原菌，因此，筛选具有几丁质酶活性的拮抗微生 物，一方面可以直接利用其抑制植物病原菌的生长，研发高效微生物杀菌剂；另一 方面可以通过克隆几丁质酶基因，为转基因植物和构建生防工程菌株提供抗病基因 资源。 1．本研究通过平板透明圈法从大量生防菌中筛选获得一株具有几丁质酶活性的细 菌菌株CAB．1，该菌株对番茄灰霉病菌等多种植物病原真菌表现较强的拮抗活性。 通过生理生化、16S 菌(Bacillus atrophaeus)。 2．通过对菌株CAB．1全基因组序列进行分析和功能预测，发现该菌株存在两个几 出这两个几丁质酶的编码基因。其中chitl基因全长为1791 bp，编码596个氨基酸， 预测分子量为65．8KDa，chit2基因全长为2091 bp，编码696个氨基酸，预测分子 量为77．8KDa，两个几丁质酶基因序列间隔64 bp。序列对比发现，菌株CAB．1中 的chitl几丁质酶核苷酸序列与萎缩芽孢杆菌模式菌株1942菌株中的几丁质酶基因 性都高达99％；chit2几丁质酶基因与短小芽孢杆菌几丁质酶操纵元序列 基酸的信号肽序列，其后有三个保守结构域包括几丁质催化域jFIII纤连蛋白结构 IIIlike 域(Fibronectin type 质酶中的B亚族。chit2编码的氨基酸序列N端也存在一个信号肽序列，长度为32 个氨基酸，且该蛋白也属18家族几丁质酶，但只有催化域，缺乏FIII纤连蛋白结构 域和几丁质结合域。 表现出几丁质酶活性，利用DNS法测得如ffJ原核表达产物的几丁质酶活性强于 chit2。其中chitl的原核表达产物对番茄灰霉菌分生孢子的萌发具有较强的抑制作 条件进行优化，发现在30℃下振荡培养，IPTG浓度为0．5mmol／L时其目的蛋白表 达量最高。 关键词：萎缩芽孢杆菌；几丁质酶；基因克隆；原核表达 and ofchitinase frombiocontrol Cloningprokaryoticexpressing encodinggenes strainBacillus CAB一1 agent atrophaeus Aluthor：Shilei Advisor：Prof．Ma ping Major：PlantPathology Abstract Asthe of resistanttochemical and problemsplantpathogen fungisidesfungicide and residue worse was moreattentionto diseases worse，biocontrol getting paid plant Wasthemain of cell couldbe management．Chitin wall，and