日本血吸虫转化生长因子的鉴定及其与日本血吸虫病性肝纤维化的关系.pdfVIP

日本舡吸虫转化生长|人1了的签定及其与日本血吸虫病性肝纤维化的关系 中文摘要 日本血吸虫转化生长因子的鉴定及其与日本血吸虫病性肝 纤维化的关系 专业：免疫学 硕士生：赵晶晶 导师：李孜副教授 广州医学院病原生物学与免疫学教研室 摘 要 日本血吸虫病是一种具有寄生性、地方性、自然疫源性、严重危害人类健康 的人兽共患型寄生虫病。宿主接触到含有尾蚴的疫水后，尾蚴可钻皮进入宿主体 内并转化为童虫，童虫在体内迸一步发育，待性器官成熟后雌雄合抱，移行至门 脉一肠系膜静脉系统定居并交配产卵，虫卵主要沉积在肠壁组织和肝脏组织内。 沉着于组织内的虫卵的卵细胞约经ll天即发育成毛蚴。由于成熟虫卵内毛蚴的 分泌物可透过卵壳，引起虫卵周围组织和血管壁发生炎症坏死继而形成虫卵肉芽 肿和肝纤维化，因此，虫卵是导致慢性血吸虫病甚至发展为晚期血吸虫病的主要 致病因素。 血吸虫与宿主相互作用，采用分子／抗原伪装、模拟，合成神经性分子和抑 制宿主免疫效应的物质等方式参与免疫逃避，同时血吸虫体表还分布着某些能和 宿主分子相结合的受体，利用宿主免疫反应所提供的某些效应分子如转化生长因 factor 子131(transforminggrowth131，TGF一131)，促进自身的发育、成熟和生殖。 在多种细胞因子中，TGF．pl是目前公认的最强的肝纤维化促进因子之一。肝星 stellate 状细胞(hepaticcell，HSC)的激活是肝纤维化发生的中心环节，脂质过 和细胞外基质(extracellular 内皮细胞对纤溶酶原激活因子抑制剂合成增多、抑制HSC合成胶原蛋白酶、促 使HSC表达基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)等抑制ECM的正常降解。大量间质 l 胶原和其他ECM成分，首先沉积于Disse间隙，最终导致肝纤维化。TGF一6 只本衄吸虫转化生长I圈子的箍定及其与只本I缸吸虫病性肝纤维化的关系 中文摘要 亦是一种免疫抑制因子，可对细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫中起着免疫抑 制作用。 TGF一13超家族由一类结构和功能都相似的多肽生长因子亚家族组成，其中 TGF．6亚家族是成员之一，包括TGF—Dl～6，在哺乳动物中表达并已克隆的有 TGF．Dl～3，种属间具有高度的同源性。TGF．131可以以有活性或无活性的形式 存在于机体中，活化后的TGF．131与细胞膜上的特异受体结合通过Smad信号转 导途径发挥生物学作用。由于它在各物种间高度保守，故推测在日本血吸虫中亦 可能存在TGF．131基因，在日本血吸虫病性肝纤维化的形成方面起着一定的作用。 研究目的： 在本课题组已克隆、表达的SjTGF．131成熟肽的基础上，通过RACE方法获 得囝3GF．Ol基因eDNA序列。利用生物学信息技术对所获得的序列进行理论分 析和功能预测；原核克隆、表达SjTGF．Dl部分eDNA序列，并对表达的蛋白行 免疫反应性分析；对该基因在虫体生长的各个时期的转录水平、表达水平进行检 测，以初步确定在日本血吸虫中是否存在TGF．Bl基因；同时检测在日本血吸虫 感染小鼠不同时期肝脏的TGF．6l表达水平，以及在不同感染阶段小鼠血浆中的 TGF．131，初步探讨虫源性和宿主源性的TGF．131在日本血吸虫致宿主肝纤维化 过程中的作用。 研究方法： 利用GeneBank，ExPASy等对该基因序列进行生物学信息分析，设计特异性引物， 株。利用PCR、酶切和测序方法对重组质粒鉴定，经IPTG诱导重组蛋白表达， 获得重组工程菌株高效表达的目的蛋白，并对该蛋白进行免疫反应性检测。 (2)采用荧光定量PCR技术，利用特异性引物分析国rGF．131基因在尾蚴、 同本ffIL吸虫转化生长闪予的鉴定及其与R本斑吸虫病性肝纤维化的关系 中文摘要 虫卵、雌、雄成虫和$感染小鼠各个时期肝脏中的转录水平：