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浅析生物化学中的关键技术 学校：assf 院系：生物技术 班级：117 学号：05 姓名：lee 电话：12842516521 浅析生物化学中的关键技术 关键技术一：电泳 　　电泳（Electrophoresis）是指带电荷的粒子或分子在电场中移动的现象称为电泳。大分子的蛋白质，多肽，病毒粒子，甚至细胞或小分子的氨基酸，核苷等在电场中都可作定向泳动.1937年Tiselius成功地研制了界面电泳仪进行血清蛋白电泳，它是在一U型管的自由溶液中进行的，电泳后用光学系统使各种蛋白所形成折光率差别成为曲线图象，将血清蛋白分为白蛋白，α1-球蛋白，α2-球蛋白，β-球蛋白和γ-球蛋白五种，随后，Wielamd 和Kanig 等于1948年采用滤纸条做载体，成功地进行了纸上电泳。从那时起，电泳技术逐渐被人们所接受并予以重视，继而发展以滤纸，各种纤维素粉，淀粉凝胶，琼脂和琼脂糖凝胶，醋酸纤维素薄膜，聚丙烯酰胺凝胶等为载体，结合增染试剂如银氨染色，考马斯亮蓝等大大提高和促进生物样品着色与分辨能力，此外电泳分离和免疫反应相结合，使分辨率不断朝着微量和超微量（1ng～0.001ng）水平发展，从而使电泳技术获得迅速推广和应用。在此主要介绍常用电泳的一般原理及其应用. 电泳的基本原理　　如果把生物大分子的胶体溶液放在一个没有干扰的电场中，使颗粒具有恒定迁移速率的驱动力来自于颗粒上的有效电荷Q和电位梯度E.它们与介质的摩擦阻力f抗衡。在自由溶液中这种抗衡服从Stokes定律. 　　F=6πrvη 　　这里v是在介质粘度为η中半径为r的颗粒的移动速度。但在凝胶中，这种抗衡并不完全符合Stokes定律.F取决于介质中的其他因子，如凝胶厚度，颗粒大小，甚至介质的内渗等。 　　电泳迁移率(mbility)m规定为在电位梯度E的影响下，颗粒在时间t中的迁移距离d. 　　d 　　m= ------------ 或 m=V / E 　　t·E 　　迁移率的不同提供了从混合物中分离物质的基础，迁移距离正比于迁移率。 影响电泳的因素 　　电泳介质的pH值 缓冲液的离子强度 电场强度 电渗现象 电泳所需的仪器电泳所需的仪器有：电泳槽和电源。 电泳技术的应用 　　1． 聚丙烯酰胺凝胶电泳可用做蛋白质纯度的鉴定 2． SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可测定蛋白质分子量.　　3． 聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于蛋白质定量。 　　4． 琼脂或琼脂糖凝胶免疫 胶体粒子在重力场或普通的离心力场中沉降极为缓慢，实际上无法测定其沉降速度。1924年瑞典科学家Svedberg研制成超离心机，其转速比普通离心机大大提高，现在超离心机的离心加速度已达到重力加速度的106以上，从而可以对胶体粒子进行沉降分离和分析，这称作超离心法。超离心法是瑞典化学家Svedberg于1940年设计的，广泛地用于蛋白质分子的分离与分析。他所采用的原理是蛋白质颗粒会在250000~500000g的离心作用下从溶液中沉降下来: 型号 零件号 转筒驱动: 马达: 1MJ6 1250.180.99-82 变频器: ACS550-01-045A-4 1028.296.30 螺旋驱动: 马达: 1MJ6 1250.132.70 变频器: ACS550-01-015A-4 1028.300.30 齿轮箱油位: UNS-1000 1125.027.10 转筒主转速与差速测量 福乐伟离心机带SIMP-DRIVE? 1. 主转速： 转筒主转速在离心机的齿轮凸边缘，由触点式感应转换器测量。 转换器每旋转一次，发出4次脉冲信号。 因此，输入频率也被分成4次，转换器将每分钟转数转换为主转速，同时监测。 2. 螺旋差速： 螺旋差速在齿轮输入轴处，由触点式感应转换器测得。 转换器每旋转一次，发出4次脉冲信号。 因此，输入频率也被分成4次；同时，也产生了齿轮输入轴的速度。 输入轴的速度由齿轮传动速比分配，转换器将每分钟转数转换为差转速，同时监测。 关键技术三：同位素标记 同位素标记法：同位素可用于追踪物质的运行和变化规律。借助同位素原子以研究有机反应历程的方法。即同位素用于追踪物质运行和变化过程时，叫做示踪元素用示踪元素标记的化合物，其化学性质不变。科学家通过追踪示踪元素标记的化合物，可以弄清化学反应的详细过程。这种科学研究方法叫做同位素标记法