水稻蛋白二硫键异构酶基因沉默载体构建及转基因后代高温结实特性分析.pdfVIP

作物学报 ACTAAGRONOMICA SINICA 2013，39(5)：816—826 http：／／www．chinacrops．org／zwxb／ ISSN 0496—3490；CODEN TSHPA9 E—mail：xbzw@chinajouura1．net．cn D0J：10．3724／S J．1006．2013．00816 水稻蛋白二硫键异构酶基因沉默载体构建及其转基因后代的高温结实 特性分析 刘光快 曹珍珍 韦克苏 潘 刚 苏 达 张春娇 程方民 浙江大学农业与生物技术学院，浙江杭州 310058 摘 要：采用 RT-PCR法亚克隆了PD，基因保守区内450bp的靶标序列作为干扰区段，构建了含有内含子 hpRNA (ihpRNA)的双元表达载体 pTCK303一RiOsPDI，经农杆菌介导转化 日本晴，获得转基因植株；通过在 T代对其潮霉素 (Hyg)抗性基因的PCR鉴定，确定携带有干扰片段的T-DNA 区已整合到水稻基因组中，且在转基因T代符合 3：1 的分离模式。半定量PCR和荧光定量 PCR的检测结果表明，PD 基因沉默转基因阳性植株不同器官中的PD，表达量 均显著降低，尤其是其籽粒中表达量较微，几乎能引起靶基因80％左右沉默。对转基 因T代植株的高温结实特性和 籽粒理化品质的检测结果，PD1基因沉默会引起高温胁迫处理下结实率的大幅度降低，耐热性显著下降，但其在常温 处理下的结实率与对照之间无显著差异。此外，PDI基因沉默后，稻米的透明度下降、垩向度增加，但对籽粒粗蛋白 总量和直链淀粉含量的影响不甚明显。 关键词：水稻；蛋白二硫键异构酶；基因沉默；RNAi载体构建；高温胁迫；结实特性 RNAiVectorConstructionforProteinDisulfideIsomeraseGeneandSeedSet． tingCharacteristicsin OffspringofTransgenicRiceunderHighTemperature Treatment LIU Guang—Kuai，CAO Zhen—Zhen，W EIKe—Su，PAN Gang，SU Da，ZHANG Chun—Jiao，and CHENG Fang．M in CollegeofAgricultureandBiotechnology,ZhejiangUniversity,Hangzhou310058，China Abstract：Toclarifytheeffectof删 genesilenceonriceyieldtraitsandgrainquality,wesubcloneda450bDRNAifragment from NipponbarebyI PCR，andsuccessfullyconstructedabinary—vectorpTCK303一RiOsPDIcontainingintronhpRNA (ih— pRNA)，thentransformeditintothecallusofwildtypeNipponbaremediatedbvEHAl05．TheT-DNAregionforPDIRNAinter- ferenceinregeneratingriceplantswasintegratedwithricegenomeviasinglecopyinTogenerationtransgenicplantsandshowed ， a3：1geneticmodein T1transgenicpopulation．whichcouldbeconfomr edbyPCR amplifyinganalysisandSouthernblotting identification．ThePCR andqRT-PCR ofrPD，geneexpressionindifferentorgansshowedthatthereweremuch1owerlevelof PD，expressioningrains，leaves，stem andsheathfortransgenicplantscomparedwiththoseofrwildtypeNipponbare，witha1． most80％