FGF1和PD98059对成年大鼠原代肝细胞增殖及FGFR2表达影响.pdf

FGFI和PD98059对成年大鼠原代肝细胞增殖和FGFR2表达的影响 摘要 表达的影响 专 业：消化内科 硕士研究生：余丽君 导 师：周晓东研究员 摘 要 我国是肝病的高发区，各种原因所致的肝脏功能衰竭十分常见，一般药物治 疗效果差，故临床死亡率一直居高不下，成为危及肝病患者生命的主要原因。 当前，在治疗肝衰的努力中人们已开发了整体肝移植术，生物人工肝体外支持系 统及肝细胞移植等方法。整体肝移植术是目前治疗不可逆性肝衰的一种临床手 段，该领域最主要的问题是供体肝的缺乏，且部分急性肝功能衰竭和先天性肝酶 缺陷症患者也并非整体肝移植术的绝对适应症。生物人工肝脏体外支持系统的关 键性组件是高性能生物反应器，当今几乎所有的生物型人工肝脏都以培养肝细胞 为基础，理想的肝细胞源、适宜的体外培养技术、肝细胞机能的表达及有效的生 活物质交换等方面，都还需要进行大量地研究工作。肝细胞移植已受到广泛关注， 在此研究领域里，对如何选择细胞来源和优化其移植环境，目前有着各种思考和 尝试，移植与被移植之间的相容性、适应性与互选互动性对移植的成功率有着非 常重要的影响。实际上，选择适当的细胞生长亚群和提供优化的细胞生长环境以 及与之相适应的移植靶位是整个细胞移植设计工作中不可忽略的问题。 多年前日本学者通过大量实验发现，某些肝功能衰竭动物的脾脏几乎能被移 ofthe 植的肝细胞占据的现象，即“肝化脾”(hepatizationspleen)的存在， 同时，发现这些移植的肝细胞在移植体中长期保持着存活状态及功能，可打断肝 功衰竭造成的机体代谢恶性循环，并能为受损肝脏的机能自主性恢复起着过度性 桥梁的作用。Mitsui教授指导课题组的研究人员，在脾组织内首先发现并证实 了一种新型脾源性肝细胞丝裂原，即后来重新命名的酸性成纤维细胞生长因子 FGFl和PD98059对成年大鼠原代肝细胞增殖和FGFR2表达的影响 (acidicfibroblast growth 力促进肝细胞的体外生长，在原代肝细胞培养的体外实验中，发现FGFl高亲和 受体79kDa亚基的上调或下调性表达控制着肝细胞对FGFl的反应性，79kDa— FGFR2通过其异质性变化调节着128kDa—FGFR2功能基的状态。FGFl携带的信 息是通过与存在于细胞表面的FGFR2结合传递到胞内的。受体FGFR2与多数生长 Kinase 因子受体～样，都是酪氨酸激酶型受体(ReceptorTyrosineRTK)。既 往的研究发现RTK通过MAPK、P13K和PLC3条通路传导信号，在呼吸系统、心 血管系统都有研究者发现MEK抑制剂PD98059能抑制住FGFl的活性。 目的 我们的实验是在体外培养的培养基内加生长因子FGFl和MEK特异性阻滞剂 PD98059，观察二者对原代培养的成年sD大鼠肝细胞增殖、功能保持及FGFl结合 的胞膜受体FGFR2表达量的影响，希望我们的努力可以窥得冰山一角。 方法 采用两步法原位灌注取肝细胞，台盼蓝染色并计数，检测细胞活力。按照 2—4×105／cm2密度接种肝细胞到六孔板，培养基采用WEM，内加10％的胎牛血清， 10。M地塞米松。接种的细胞分三组，第一组不加酸性成纤维细胞生长因子FGFl 小时，显微镜下观察到细胞已贴壁，三组加入PD98059的DMSO溶解的储存液(浓 二、三组加酸性成纤维细胞生长因子使终浓度为lOng／ml，并加入lO。7M终浓度 胰岛素，37。C，5％C0。培养箱继续培养一定的时间，WesternBlot检测细胞白蛋 白的表达、7-EROD法检测细胞色素P450的活性、流式细胞仪检测细胞增殖周期 比例和受体FGFR2的表达，对培养的细胞进行形态学的观察和记录。 结果 II FGFI和PD98059对成年大鼠原代