11111热不对称PCR_TAIL_PCR_和Tn5_省略_质粒拯救法快速分离水稻条斑病菌.pdfVIP

农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2009,17(6): 1089~1095 ·研究论文· 热不对称PCR(TAIL-PCR)和Tn5 转座子质粒拯救法 快速分离水稻条斑病菌致病相关基因* 1 1 1 1 1 1,2 袁 亮 , 李玉蓉 , 张希福 , 郭 威 , 车亦舟 , 陈功友 ** (1.南京农业大学植物保护学院/ 农业部病虫监测与治理重点开放实验室，南京210095; 2.上海交通大学农业与生物学院，上海200240) 摘要：构建植物病原菌突变体库是进行新基因发掘和功能基因组学研究的有效途径之一。为快速准确地鉴定Tn5 的插入 位点和相应的功能基因，研究采用热不对称PCR(TAIL-PCR)和Tn5 转座子质粒拯救两种技术，鉴别了在筛选水稻条斑病菌 (Xanthomonas oryzae pv. oryzicola)Tn5 插入突变体库过程中获得的8 个在水稻（Oryza sativa）上毒性减弱的突变体。结果显示， TAIL-PCR 和Tn5 质粒拯救结合使用，可有效地鉴别Tn5 的插入位点和相应的功能基因。TAIL-PCR 鉴别的5 株突变体是Tn5 分别插入在分泌系统结构蛋白F 基因(gspF) 、cAMP 调控蛋白、膜镶嵌蛋白酶酶原、S- 蛋硫氨酸脱羧酶亚基和gspJ 基因上；Tn5 质粒拯救法鉴别的3 株突变体是Tn5 分别插入在致病性蛋白、功能未知的保守蛋白和鞭毛特异性ATP 合酶基因上。序列同源 性分析发现，8 株突变体Tn5 插入的基因与基因组测序的BLS256 菌株中的对应基因同一性达 100%。这表明，TAIL-PCR 和 Tn5 质粒拯救技术可有效地应用于植物病原菌Tn5 突变体库的鉴别和目标基因的分离。 关键词：水稻条斑病菌；Tn5 转座子；热不对称PCR(TAIL-PCR) ；质粒拯救；致病性 中图分类号:S188 文献标识码:A 文章编号:1006-1304(2009)06-1089-07 Quick Identification of Pathogenicity-related Genes in Xanthomonas oryzae pv. oryzicola by Thermal Asymmetric Interlaced PCR (TAIL-PCR) and Tn5 Transposon Rescue 1 1 1 1 1 1,2 YUAN Liang , LI Yu-rong , ZHANG Xi-fu , GUO Wei , CHE Yi-Zhou , CHEN Gong-you ** ( 1.Key Laboratory for Monitoring and Management of Plant Diseases and Insects, Ministry of Agriculture / College of Plant Protection, Nanj ing Agricultural University, Nanj ing 2 10095, China; 2.Colleage of Agriculture and Biology, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 20024