超声波辅助萃取法提取仙鹤草中总黄酮工艺的研究--化学设计实验方案.docVIP

《化学设计实验方案超声波辅助萃取法提取仙鹤草中总黄酮的工艺研究 1 本课题的理论和实际意义 仙鹤草（Agrimoniae Herba）为蔷薇科植物龙牙草Agrimonia pilosa Ledeb．的干燥地上部分，具有收敛止血，截疟，止痢，解毒，补虚之功效。多用于治疗咯血，吐血，崩漏下血，疟疾，血痢，痈肿疮毒，阴痒带下，脱力劳伤等[1]。仙鹤草对多种肿瘤都有较好的疗效，在抑制瘤体增殖，增强放化疗敏感性，减轻放化疗毒副作用，阻止癌前病变，及提高机体免疫功能等方面效果尤为明显 [2]，仙鹤草提取物还具有明显的降血糖[3]、抗菌[4]、抗氧化[5]等作用。仙鹤草主要含有鞣酸类、间苯三酚缩合体、黄酮类、有机酸、内酯和香豆素类成分[6-7]。本文着重对仙鹤草中总黄酮的提取工艺进行了研究。 仙鹤草中总黄酮的提取工艺研究仙鹤草总黄酮率的高低有重要意义[8]采用正交实验设计，以仙鹤草中总黄酮和总多酚含量为指标优选其提取工艺。结果 优选提取工艺条件为仙鹤草加8倍量50 %乙醇，回流提取3次，每次1 h。结论 确定的工艺合理，有效成分提出率高。 范尚坦等[9]采用正交实验法，以总黄酮为指标寻找仙鹤草最佳的提取工艺；采用紫外分光光度法在波长为510nm处测定仙鹤草中总黄酮含量，结果：总黄酮质量关系浓度在20~100μg/mL范围内与吸光度线性良好，平均加样回收率（n =6）为99.2%，RSD为1.3%；仙鹤草中总黄酮含量为2.5% 左右。 蒋志华等[10]优化了仙鹤草总黄酮的最佳超声提取工艺。方法: 以总黄酮提取率为指标，采用响应面设计方法对影响总黄酮提取率的乙醇体积分数、超声温度及料液比进行优化。结果: 各因素对总黄酮提取率的影响大小依次为料液比-超声温度-乙醇体积分数。最佳工艺条件为72% 乙醇，料液比1:25，60 ℃ 下超声提取20 min。结论: 利用超声提取仙鹤草总黄酮工艺稳定可靠。 本文采用NaNO2-A1(NO3)3- NaOH法测定总黄酮，利用超声提取仙鹤草总黄酮进行单因素实验和正交设计中的最佳工艺条件仙鹤草提供理论依据。 2试验材料与仪器 2.1试验材料 （1）仙鹤草，来自于河北同仁堂(集团)上海化学试剂公司； （3）无水乙醇，NaNO2，Al (NO3)3，NaOH，甲醇，丙酮 2.2试验仪器 （2）HS-3120型超声波清洗器, , 上海楚定分析仪器有限公司； （3）TU-1901双光束普析通用.1 标准曲线的制作 采用NaNO2-A1(NO3)3- NaOH法测定总黄酮。准确称取芦丁标准品6.0 mg，置10mL容量瓶中加甲醇适量，置水浴上微热使溶解放冷，加甲醇置刻度，摇匀。精密mL，置mL容量瓶中，加水刻度摇匀，即得（每mL中含芦丁mg）。量取对照品溶液mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL与6mL,分别置mL容量瓶中，各加水至mL, 加5%的NaNO2溶液1mL,混匀，放置min，加1Al(NO3)3溶液1mL，摇匀，放置min，加1 mol/L的NaOH溶液10mL,再加水至刻度，摇匀，放置min，以相应的试剂为空白用紫外分光光度计在nm波长处测定吸光度以吸光度为，浓度为横坐标，绘制曲线。 .2 仙鹤草总黄酮的萃取 仙鹤草 烘干 粉碎过筛 超声波辅助萃取 过滤 定溶 定量分析 3.3仙鹤草总黄酮的测定 取2.2中的待测液0.5 mL于25 mL容量瓶中，分别置mL容量瓶中，各加水至mL, 加5%的NaNO2溶液1mL,混匀，放置min，加1Al(NO3)3溶液1mL，摇匀，放置min，加1 mol/L的NaOH溶液10mL,再加水至刻度，摇匀，放置min，以相应的试剂为空白用紫外分光光度计在nm波长处测定吸光度 总黄酮提取率(%) = 4 单因素试验 3.1不同溶剂1g的仙鹤草粉末3份分别于3个l00mL 具塞三角烧瓶中，分别加入10mL相同浓度的甲醇、乙醇、丙酮20 min，过滤，定容，以下操作的浓度 准确称取1 g的仙鹤草粉末5份分别于5个l00mL 具塞三角烧瓶中，分别加入10mL30%、%、%、%、%的20 min，过滤，定容，以下操作 3.3料液比对总黄酮得率的影响 准确称取1 g的仙鹤草粉末5份分别于5个l00mL 具塞三角烧瓶中，分别加入10mL、15 mL 、20 mL 、25 mL 、30 mL 50%的20 min，过滤，定容，以下操作 3.4 萃取时间对总黄酮得率的影响 准确称取1 g的仙鹤草粉末5份分别于5个l00mL 具塞三角烧瓶中，加入25 mL的5min、10 min、15 min、20 min、25 min，过滤，定容，以下操作 5 正交试验 正交实验因素水平表 浓度（%） （B）（ （C）% 1:15 10