RNAi在类风湿性关节炎中研究进展.docVIP

RNAi技术在类风湿性关节炎中的研究进展 丁庆军综述梁 统，周克元 审阅 （广东医学院生物化学与分子生物学研究所，广东 湛江 524023）(RA); RNA干扰RNAi）; 自身免疫 R392 11 　[文献标识码] A 类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis RA)是一种慢性、致残性的自身免疫性疾病临床表现为侵害对称性关节和关节周围组织肿痛，以关节滑膜病变为主的滑膜炎持久反复发作,导致关节内软骨和骨的破坏。尽管类风湿性关节炎的病因及发病机制至今尚不完全清楚，但大量研究表明，某些基因异常表达是RA发病的内在原因因此从基因水平上探讨治疗RA的途径将具有广阔的前景。RNAi技术作为一种新兴的基因治疗手段，与传统的基因治疗方式如反义寡核苷酸治疗等相比， RNAi具有高度的序列特异性，从而实现对目的基因的精确沉默；且干扰效率。RNAi还具有高稳定性、细胞摄取相对容易、毒性小等优点，为RA治疗带来新的希望。 1RNA干扰的作用机制 RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指外源或内源的双链RNA(dsRNA)特异性地引起基因表达沉默的现象，是一种序列特异性的转录后基因沉默(post transcriptional gene silence,PTGS)。 目前,对于RNAi 的发生机制普遍认为是:外源性(如病毒)或内源性的dsRNA在细胞内被Dicer切割成21～23 nt的RNA片段，这些小片段即为小干扰RNA (small interference RNA, siRNA)。siRNA带有3′末端羟基并且有个突出的单链核苷酸尾巴及磷酸化的5′端，是RNAi的起始诱导物。Dicer是一种进化上保守的RNA酶Ⅲ蛋白酶，具有dsRNA特异性的内切核酸酶还可以与siRNA结合形成沉默复合体(RNA induced silencing comp1ex ,RISC)。其中siRNA作为引导序列，按照碱基互补原则识别的2007- 基金项目：广东省社会发展领域科技计划资助项目（53025）。 作者简介：丁庆军（1975-）男，山东曲阜，硕士生 TelE-mail:ddfding@126.com mRNA，并引导RISC结合mRNA。在消耗ATP的情况下将mRNA切割有效地导致转录后基因的沉默 [1 ]。 RNAi技术在癌症、抗病毒、基因组等研究领域得以广泛的应用，目前，该技术在RA领域的研究和应用不广泛，但也逐渐。 2抑制TNF-α 基因表达 TNF-α是机体炎症反应与免疫应答的重要调节因子，效应与靶细胞的范围与IL-1β有很大相似性，能刺激滑膜细胞和软骨细胞合成PGE2和胶原酶，促进成纤维细胞增生，导致关节局部滑膜炎症和软骨组织破坏，TNF-α既能刺激IL-1，IL-6，IL-8的产生，又能刺激巨噬细胞增加自身的合成，在RA的细胞因子网络中起“中心犯罪”作用。传统治疗的研究表明，阻断TNF-α是有效的治疗策略，可以改善RA的病情。如表达人TNF-α的转基因小鼠可形成关节炎，用抗TNF-α抗体治疗可使关节炎症状减轻。加利福尼亚大学的Daniel E Furst博士及其同事在200512的J Rheumatol上报告了一种叫Pegsunercept的新药，对类风湿性关节炎(RA)有较好疗效，它实际上是一种肿瘤坏死因子(TNF)的抑制剂。研究显示，较高剂量组显示较大的临床改善，治疗组和安慰剂组的总体不良反应发生率相似[2]。 因此，以TNF-αmRNA为靶点，采用RNAi技术特异性抑制TNF-α mRNA的表达，减少TNF-α的分泌，对降低RA损伤，保护关节细胞功能具有重要意义。Taishi P等[3]在对大鼠的研究中发现，针对TNF-α的iRNA在体外实验可以使TNF-α mRNA下降45%，但不影响IL-6的水平；在体内与对照组相比可使TNF-α mRNA显著下降，同时也使IL-6mRNA水平降低，TNF-α反应的免疫细胞也是减少的。 Schiffelers RM等[4]以TNF-α为设计靶点，用局部注射法和将设计好的iRNA导入CIA（胶原诱导的小鼠关节炎模型）小鼠关节内，使其沉默TNF-α。结果，组强烈的抑制TNF-α进而抑制了关节的炎症，而局部注射法则没有治疗效果。 传统治疗的研究表明，TNF-α阻断药非常有效，但会出现某些不良反应，如感染、癌症、血管炎、狼疮样自身免疫性疾病、多发性硬化症样脱髓鞘疾病、肝脏疾病、血液学异常(再生障碍性贫血)、淋巴瘤、严重的变态反应等，不过这些不良反应所占的比例比较低[5]。RNAi技术特异性抑制TNF-α mRNA的表达是否会引起上述不良反应还需要进一步的研究。 抑制NF-[kappa]B基因表达 NF-κB是1986年