林洪_粉菠萝离体诱导和增殖培养的研究.docVIP

学 士 学 位 论 文 论文题目 粉菠萝离体诱导和增殖培养研究 作者姓名 指导教师 洪燕萍 学科(专业) 生物 所在学院 生命科学学院 提交日期 二零一年月 粉菠萝离体诱导和增殖培养研究 生命科学学院 林洪 指导教师：洪燕萍 .1 mgL-1+BA 5 mgL-1为诱导培养基， 以.MS+BA2mgL-1+NAA0.2mgL-1为增殖培养基，以MS+BA2 mgL-1+NAA 0.5 mgL-1为促生长的培养基可获得较好效果。 【关键词】：粉菠萝；离体诱导；增殖培养 目 录 引 言 4 1材料和方法 5 1.1 材料 5 1.2培养基 5 1.3 方法 5 1.3.1洗涤、清理和灭菌 5 1.3.2接种 5 1.3.3培养观察 5 2.结果与分析 5 2.1诱导培养 5 2.2增殖培养 6 3 讨论 7 3.1操作的讨论 7 3.2诱导的讨论 7 3.3结果的讨论 7 致谢语 7 参考文献 8 附图（三周前后芽丛对比图）……………………………………………………………………………………9 .引 言 属多年生附生常绿草本植物“莲座状”叶丛，叶革质，宽线形，长40－60厘米，宽5－7厘米，叶端钝圆有短突出，绿色，被灰色鳞片，叶面上有银灰色的横走细致斑条，叶背粉绿色，叶缘密生深色的细刺。总花梗从叶丛中抽出，淡红色，穗状花序集生成圆锥球状，密生着粉红色的苞片，苞片呈披针形，缘带细刺。小花初开时蓝紫色，后变桃红色。观赏期达数月之久，是一极受欢迎的品种，由于花序粉红美丽，商品称之为“粉佳人”。.1mgL-1+BA5mgL-1+琼脂0.7%+蔗糖3% (2).MS+NAA1mgL-1+BA3mgL-1+琼脂0.7%+蔗糖3% (3).MS+NAA3mgL-1+BA1mgL-1+琼脂0.7%+蔗糖3% 增殖培养基： (1).MS+BA2mgL-1+NAA0.2mgL-1 +琼脂0.7%+蔗糖3% (2).MS+BA2mgL-1+NAA0.3mgL-1+琼脂0.7%+蔗糖3% (3).MS+BA2mgL-1+NAA0.5mgL-1+琼脂0.7%+蔗糖3% (4) MS+BA1mgL-1+NAA0.1mgL-1+琼脂0.7%+蔗糖3% 1.3方法 1.3.1洗涤、清理和灭菌 将整株粉菠萝连根拔起，修整掉老叶片，留下稍嫩点的叶片，用软毛刷除去叶片上的粉尘和茎部与主根上的泥土，自来水冲洗30min以上，再放入超净工作台进行外植体的表面灭菌。先在浓度75%酒精中浸泡30s，然后再用浓度0.1%的升汞（加1~2滴吐温）灭菌7min，并不断摇动，最后用无菌水冲洗5~6次，置于无菌水中备用[8]。 1.3.2接种 剪去被升汞杀死的叶片边缘，将嫩叶剪成边长0.5~1cm的方形叶，分别接于(1)、(2)、(3)号培养基中，每号培养基接3瓶，每瓶接3片；将茎部用手术刀切掉边缘部分（有嫩芽的留住芽），切成立方体块状，分别接于(1)、(2)、(3)号培养基中，每号培养基接3瓶，每瓶接3块；也将根部用手术刀切掉边缘部分，切成立方体块状，分别接于(1)、(2)、(3)号培养基中，每号培养基接3瓶，每瓶接3块[9]。 1.3.3培养观察 将接种好的培养瓶置于培养箱中，温度（25±2）℃左右，光照2000lux，16h/d[10]。 1.3.4增殖培养 将已经冒绿芽的愈伤组织对半切成2块后接于增殖培养基中，每号接3瓶，每瓶1块。 2.结果与分析 2.1诱导培养 一周后，部分接根的培养基染菌，菌体为灰白色辐射状；两周后大部分的接根培养基染菌，菌体多样。怀疑是根部表面的细菌没有消除干净，使得培养基极易染菌。最后，接根的培养基全部染菌。所以根的诱导率极低。 一周后，接叶的培养基边缘褐化，两周后大部分叶片大面积褐化。怀疑是用剪刀剪叶片使得边缘细胞受损严重，且剪后长时间暴露空气中而被氧气氧化所致。一个月后仍不见愈伤组织生成，所以，叶的诱导率也极低。 接茎的培养基中无染菌且无褐化，但是也都一直没有萌动，一个月后发现茎变黑，无愈伤组织生成。所以，茎的诱导率也极低。 只有接芽的培养基中发现一个月（30天）后有芽萌动状态。三种培养基都接了1瓶带芽的茎段，发现芽萌动快慢不一，愈伤组织生长状况不一，还发现愈伤组织表面有小芽冒出，以MS+NAA0.1mgL-1+BA5mgL-1的培养基中（即1号诱导培养基中）芽的萌动早，生长快。分析原因是本来芽就容易诱导愈伤组织，且1号培养