三种蔬菜抗氧化活性比较的研究.docVIP

生化分离技术实验 题 目：三种蔬菜的抗氧化活性比较研究 姓 名: 王祖喜 学 院：生命科学与技术学院 班 级：2010级生物技术1班 学 号：座机电话号码977 指导老师：张永明 时 间：2013年4月6日 三种蔬菜的抗氧化活性比较研究 王祖喜 内蒙古师范大学生命科学与技术学院 摘要：了解自由基和抗氧化剂的相关知识，本实验用T-AOC法测定生芹，生姜和茄子的抗氧化能力，并比较其相应能力的大小，为蔬菜的抗氧化性提供一定的依据。 关键字：自由基；抗氧化剂；T-AOC法； 近些年随着生活水平的不断提高, 人们的保健意识逐渐增强, 对具保健功能的食品需求日趋增长。研究表明, 蔬菜的摄入量与癌症、心脏病、高血压及中风等的发病率呈负相关, 这与其中所含的多种功能性物质, 如酚类化合物、类胡萝卜素、硒、纤维素等密切相关[1]。 自由基是人体生命活动中各种生化反应的间代谢产物, 具有高度的化学活性。过量的自由基会引起细胞、机体的损伤, 从而导致多种疾病的发生[1]。而抗氧化剂（ Antioxidants）是阻止氧气不良影响的物质。 它是一类能帮助捕获并中和自由基，从而祛除自由基对人体损害的一类物质[1]。人体的抗氧化剂有自身合成的，也有由食物供给的。 蔬菜中含有多种抗氧化成分, 除了我们熟知的维生素C、维生素E、β胡萝卜素等, 还含有黄酮、酚酸类物质, 它们之间的协同、叠加使得蔬菜的抗氧化作用进一步增强[1]。因而, 近几年来蔬菜的抗氧化作用及其机理成为研究的热门。因而本实验主要以学习前人经验为主，采用T-AOC法测定生芹、生姜和茄子的抗氧化性，以便为周边人宣传其相关知识。除此，由于生姜、生芹和茄子之类的蔬菜价格便宜，对此，他们的提取具有很好的产业化价值。 1实验材料与方法 1.1 实验材料 购买于东瓦窑菜市场的三种蔬菜，分别是生姜，茄子，水芹。 1.2 试剂与仪器 试剂：蒸馏水，70％乙醇，抗氧化活性测定试剂盒（T-AOC） 仪器：研钵，玻璃棒，烧杯，量筒，离心机，洗瓶，洗耳球，移液枪等。 1.3 实验方法 1.3.1 材料的预处理 首先对实验材料进行清洗，用滤纸吸干多余的水份之后，各称取1g分别放于标号为A的滤纸上；再分别称取1g分别放于标号为B的滤纸上。 1.3.2组织与细胞的破碎 将标号为A滤纸的蔬菜分别放于三个研磨中研磨4分钟，随后加入加一定量的蒸馏水（固液比1：10）。同样将标号为B滤纸的蔬菜分别放于三个研磨中研磨4分钟，随后加入加一定量的70%的乙醇（固液比1：10）。值得注意的是，固液比1：10，既1g样品中加10ml水或70％乙醇溶液，其中包括清洗研钵用的水也要进行计算。 1.3.3 抗氧化性物质的提取与分离 将3种悬浮液（溶剂为水或加 70%乙醇，37°C恒温水浴 浸 提 20 m i n , 6 0 0 0 r / m i n 离 心1 0 min ,取上清液。 1.3.4抗氧化活性检测：T-AOC法 取六支试管，分别标上生姜对照管，生姜待测管；茄子对照管，茄子待测管；生芹对照管，生芹待测管；分别用T-AOC法做抗氧化性活性试验。 2结果与分析 2.1 进行T-AOC法实验 按表1分别对生姜、生芹、茄子做T-AOC实验 表1 T-AOC法实验步骤 对照管（ml） 待测样品（ml） 试剂Ⅰ 1 1 样品 --- 1 试剂Ⅱ 1 1 试剂Ⅲ 0.5 0.5 在37℃水浴中放置30分钟 试剂Ⅳ 0.1 0.1 样品 1 --- 试剂Ⅴ 0.1 0.1 2.2 总抗氧化活性的测定结果 滤纸A上的材料，以蒸馏水做空白，测定3个样品管和3个对照管520nm处的OD值，其结果数据为表2. 表2 蒸馏水提取0.1g各蔬菜A值 OD 生姜A/0.1g 水芹A/0.1g 茄子A/0.1g 对照管 0.089 0.090 0.256 待测样品 0.400 0.130 0.338 差值 0.311 0.04 0.082 滤纸B上的材料，以70%的乙醇做空白，测定3个样品管和3个对照管520nm处的OD值，其结果为表3. 表3 70%乙醇提取各0.1g蔬菜的A值 生姜A/0.1g 水芹A/0.1g 茄子A/0.1g 对照管 0.218 0.080 0.087 待测样品 0.472 0.209 0.204 差值 0.254 0.129 0.117 总抗氧化活性单位定义：37度时，每毫克样品，使反应体系的吸光度（OD值）每增加0.01时，为一个总抗氧化能力单位。即1g总抗氧化能力