浙江大学生物化学实验甲 2011-酵母蔗糖酶提取原理.docVIP

酵母蔗糖酶的制备原理 一、蔗糖酶(invertase or sucrase)简介 蔗糖酶（EC.3.2.1.26）为水解酶类，主要存在于酵母中，如啤酒酵母、面包 酵母，也存在于曲霉、青霉和毛霉等霉菌和细菌及植物中，可专一性地催化蔗糖水解为果糖和葡萄糖的反应。 酵母蔗糖酶的分子量约270000D（因来源不同，分子量有差异），pI约5.6，最适pH4.6，耐酸和热，最适温度50℃。耐乙醇，因此可用乙醇沉淀进行分离纯化。 二、酵母蔗糖酶的分离纯化 本试验分离纯化酵母蔗糖酶分四步：缓冲液抽提，加热纯化，乙醇分级沉淀， DEAE-Sepharose柱层析分离纯化。 前三步分离纯化的原理如下： ㈡、离子交换DEAE-Sepharose柱层析分离纯化的原理 离子交换柱层析分离混合物的基本原理 离子交换层析（Ion Exchange Chromatography）是一种根据待分离物质的 阳或阴离子和相对应的离子交换剂间的静电结合，即根据物质酸碱性、极性等差异，通过离子间的吸附和脱吸附而将溶液中各组分分开的一种技术。 离子交换层析是一种液-固相层析技术。其中，液相称洗脱液，固相的惰性支持介质称离子交换剂。在离子交换剂上具有带电基团，不同的交换