MDA和电导率的测定方法.docVIP

测定小麦生理生化指标 丙二醛(MDA)含量的测定 实验用品 小麦样品、0.05mol/LpH7.8磷酸钠缓冲液；石英砂；5%三氯乙酸溶液（称5g三氯乙酸用蒸馏水定容至100mL）；0.5%硫代巴比妥酸溶液硫代巴比妥酸硫代巴比妥酸A600)×V1×V]/（1.55×0.1×W×V2） 式中：—分别代表532和600nm波长下的吸光度值。V—提取液总量（5mL） V1—反应液总量(4mL) V2—反应液中的提取液量(2mL) W—植物样品重量(0.5g) 1.55×0.1—丙二醛的微摩尔吸光系数 电导率的测定 【仪器与用具】电导率仪1台；真空泵（附真空干燥器）一套；恒温水浴1具；水浴试管架1个；20ml具塞刻度试管10支； 10ml移液管（或定量加液器）1个；试管架1个；铝锅1个；电炉1个；镊子1把；搪瓷盘1个；记号笔1支；去离子水适量；滤纸适量；塑料纱网（约3cm2）6片。 【方法】1．容器的洗涤 电导法对水和容器的洁净度要求严格，水的电导值要求为1~2μS（微西门子）；所用容器必须彻底清洗，再用去离子水冲净，倒置于洗净而垫有洁净滤纸的搪瓷盘中备用。为了检查试管是否洁净，可向试管中加入电导值在1～2μS的新制去离子水，用电导仪测定是否仍维持原电导。 3．测定（1）将小麦样品去离子水冲洗两次，再用洁净滤纸吸净表面水分。（2）在装有小麦的管中加入10ml的去离子水，并将大于试管口径的塑料纱网放入试管距离液面1cm处，以防止小麦在抽气时翻出试管。然后将试管放入真空干燥箱中用真空泵抽气20min（也可直接将小麦放入注射器内，吸取10ml的去离子水，堵住注射器口进行抽气）。 （3）将试管置室温下保持1h，其间要多次摇动试管，或者将试管放在振荡器上振荡1h。 （4）1h后将试管充分摇匀，用电导仪测其初电导值（S1）。 （5）测毕，将各试管盖塞封口，置沸水浴中10min，以杀死植物组织。取出试管后用自来水冷却至室温，并在室温下平衡10min，摇匀，测其终电导值（S2）。 4．计算 按下式计算相对电导度： 相对电导度（L）= 相对电导度的大小表示细胞膜受伤害的程度。 由于室温对照也有少量电解质外渗，故可按下式计算由于低温或高温胁迫而产生的外渗，称为伤害度（或伤害性外渗）。 伤害度（%）= 式中 Lt—首次实验测得的小麦相对电导度； Lck—本次实验测得的小麦相对电导度。 在电导度测定中一般应用去离子水，若制备困难可用普通蒸馏水代替，但需要设一空白试管（蒸馏水作空白），测定样品时同时测定空白电导值，按下式计算相对电导度： 相对电导度（L）= 率，即为发芽率，发芽率越高的种子，出苗越全，不同作物的种子规定的发芽天数不同，小麦为7~8天，发芽率低于85％不能作种子。