中药藤黄抗肿瘤作用机制初探.docVIP

中药藤黄抗肿瘤作用机制初探 《中华中西医杂志》 ???? 【摘要】 目的 初步研究中药藤黄抗肿瘤作用的机制。 方法 从细胞增殖周期特异性、和细胞凋亡二方面就藤黄酸对人肝癌细胞系Bel-7402的抑制作用进行研究，并观察藤黄酸对细胞微管蛋白的影响。 结果 藤黄酸对Bel-7402细胞的抑制作用表现为细胞增殖周期特异性，无明显诱导细胞凋亡的作用。 结论 藤黄酸可抑制微管蛋白聚合，影响微管形成。????关键词 藤黄酸 抗肿瘤 机制????Primary study of anti-tumor mechanism of gambogic acid????Zhang Jin，Li Baohua，Xu Guozeng，et al.????Preclinical Pharmacologic Center，Cancer Hospital，Chinese Academy of Medical Sciences，Beijing100021.????【Abstract】 Objective To study the anti-tumor mechanism of gambogic acid.Methods The effect of gam-bogic acid on liver cancer lines Bel-7402was studied by proliferation cycle and apoptosis and on canaliculus protein was observed.Results The inhibiting effect of gambogic acid on Bel-7402cell cycle particularity，but couldnt in-duce the cell apoptosis.Conclusion The gambogic acid could inhibit polymerization of canaliculus protein.????Key words gambogic acid anti-tumor mechanism????藤黄(Gamboge)是一种传统的中药制剂，系藤黄科植物藤黄所分泌的干燥树脂，主产于东南亚一带，我国南方也有分布。据祖国医学记载，本品酸涩有毒，具有消肿、化瘀、止血、杀虫等功用，临床上用于治疗痈疽肿毒、顽癣恶疮 [1] 并有抗肿瘤作用的早期报道 [2，3] ，而有效成分总藤黄酸具有抗肿瘤、抗转移和诱导肿瘤细胞分化等作用也已得到证实 [4，5] ，但其作用机制少有研究。因此我们从细胞增值周期特异性的细胞凋亡两方面就藤黄酸对肿瘤细胞的抑制作用进行了探讨，并初步观察了它对细胞微管蛋白功能的影响。???? 1 材料与方法????1.1 瘤株 人肝癌细胞系Bel7402，中国医学科学院肿瘤研究所提供。????1.2 注射用总藤黄酸 亮黄色结晶，C 33 H 44 O 8 ，分子量628.75，南京海光应用化学研究所提供。????1.3 方法????1.3.1 药物作用细胞周期特异性的研究 将处于生长对数期的Bel7402细胞用含有10%小牛血清的RPMI1640培养液稀释为1×10 5 /ml细胞悬液分装于培养瓶中，37℃，5%CO 2 培养24h，摇床轻摇0.5h，取上清，离心后收集细胞，为M期细胞，将培养瓶中贴壁细胞胰酶常规消化处理后收集为M期外细胞，以MTT法 [6] 分别就藤黄酸对二类细胞的抑制作用进行测定，药物浓度为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0μg/ml，按公式(1-试验组OD值/对照组OD值)×100%计算细胞生长抑制率，并就其随药物浓度变化作图。????1.3.2 药物诱导肿瘤细胞凋亡研究 (1)形态学观察:将处于生长对数期的Bel7402细胞用含有10%小牛血清的RPMI1640培养液稀释为1×10 5 /ml细胞悬液分装于2cm培养皿中，5ml/皿，37℃，5%CO 2 培养24h后加入以RP-MI1640培养液溶解的注射用藤黄酸使其终浓度分别为0.2、0.4、0.8、1.6μg/ml，同时设空白对照，继续培养24h后弃去培养液加入PI染色液0.5ml(20mg/ml)及Hoechst33342(2mM)50μl室温放置30min，弃去染色液PBS漂洗3次后激光扫描共聚焦显微镜(Meridian Inc Insight Plus488nm5mW)观察，随机计数100个细胞中坏死、凋亡及正常细胞并选取典型视野拍照。(2)DNA Ladder将处于生长对数期的Bel7402细胞用含有10%小牛血清的RPMI1640培养液稀释为1×10 5 /ml细胞悬液分装于培养瓶中，37℃，5%