骨髓间质干细胞向肝细胞分化的形态和分子特征及实验体系稳定性研究.pdfVIP

骨髓闯质子细胞向艇细胞分{七熊形态和分子特征段实验体系稳定性磅究 骨髓闻质于细胞氲盱缨施分亿的形态帮分子特撼 及实验体系稳定性研究 硕士研究生：刘毒波 指导老师：赵国强教授 中山大学基础医学院病理学教研室 摘 要 臀髓细胞其主疆包括职大类细胞。一类是遗血细胞，包括少量的造也于细胞、 造血椴细胞和不同发育阶段的血细胞；另一类是骨髓基质细胞，包括网状细胞、 残纾维缨麓、匿噬绥藏、鬻藐绥照帮巍窦内袋缨蘧等。一黢试为，嚣髓鏊覆缨瑰 不仅参与骨髓网状组织的构成，对造血细胞起支持住用，而且通过细胞阆的相互 接触和多种体液因子及粘附分子的作用，调节造血细胞的增殖、分化和成熟。俩 磷究袭疆曹髓萋质缀魏中还存奁藩其鸯多螽分纯懿潜戆豹缁旎群，被称为簧髓闯 质干细胞。冀在一定的条件下可向三个胚层蛉细胞分化，例如骨细胞、成软骨细 胞、脂肪细胞，骨骼肌细胞、心肌细胞、内皮细胞，神经原和肝细胞等。细胞移 植骚究发瑶移穰入体内静静髓缎胞、嚣髓造盘予缩熬及骨熬基矮予绣蔻可醴迁移 到损伤肝脏，并在那里定居、增皴和分化，参与受损艇脏细胞的露生和修复，臀 髓来源肝干细胞植在受体肝脏所占的比例可能和肝股受损伤的程度有关，更深入 豹磺究瓣涯察曹髓缩麓中约菜些维憨可在受援繇驻分纯为翳缅穗，健在辩损伤缺 如时却没有这罩申现象的发生。这魑结果提示我们，翳脏损伤的存在与骨髓题干绷 胞向肝细胞的分化的发生有着密切的联系。肝损伤很可能是干细胞激活和分化的 重要前提。我稻静静期工佟对箕进行了裙步静研究。我翻遴遗貉登法分离纯纯褥 到的正常大鼠B～ISCs，以2-AAF／CCl。程序构建急性脬损伤动物模型的取损伤后雏 肝脏萃取物作为骨髓问充质干细胞的实验组刺激物进行诱导培养，用RT—PCR技 求检测细稳分子表糯标志的交化。结栗显示：实验缀BMSCs诱导歪n天表这袖 鸯髓闼矮于缨蕤自黪缁麓分纯静形态翱分子特缝及实验体系稳定经垂嚣究 稚肝细胞标志M2一PK、GST—P，诱导至20天后出现成熟肝细胞的特异性标志 Albumin的表达，嚣对照织诱导的骨髓间兖质于细胞笼此改变。这魃结果证实了 我们先前的缓设：损伤的骶簸能够产生菜释蠢子，可黻激活于缩飚尚蠡千细胞定向 的分化。但这种诱导体系的稳定性及诱导分化过程中详细的细胞形态变化和分子 表达特征的改变尚不清楚，掰获褥的分化绷胞是否具露成熟翳细胞的功麓特征以 及其分纯眈倒也不得雨知。零试验按避一步阐明这些阏送。 实验方法：采用3％2一AAF／ccb急性肝损伤模型雌性SD大鼠的肝组织匀浆诱 鼯分离的同种雄性大鼠骨鼷闻质于绍胞，取诱导第ll天鞠第20天纲腿，RT—PCR 梭测BSTl、GST—P、M2一PK、L—PK及AlbuminmRNA的表这；免疫细脆佬学检测 AFP和AlbuminmRNA的表达；流式细胞技术检测AFP和Albumin的细胞表达率； 辩碘酸一希夫反应检测耱原的合成能力。阉时蠲正常黼葶申雌往大鼠孵匀浆终对照 臻养。 实验结果：1．骨髓按种后3天可见贴壁的克隆性生长小细胞躜出现，继续 墙券，细魏逐渐呈成纤维细胞样涟涡状生长；至第lO天，缨胞生长为近融合豹 蕈层。传代螽的缁脆仍呈成纤维祥，值漩满状生长特征不明显。传至19代静鸯 髓间质干细胞仍然保持强大的体外增殖能力。2．诱导培养开始后，第3天未见 明照形态改变，但细胞生长骥显减慢；6天螽可见成终维榉细胞缨长的腿浆突起 嬉有缩短：9天商，细胞突超缩短更魏嘲鼹：12天屠绷施主要呈簇状缓慢生长， 中央区域细胞突起完全消必黧圆形或近嘲形类上皮样形态，外周细胞以短梭形为 主，细胞团之瓣的撩疏区仍可如较多成终缝搀缨胞存农，其后残纾缀缀腿逐澎减 少；t5一t8天，上皮样细胞继续增多；至20天时几乎所有的细胞均璺上皮细胞 样。3．未诱导骨髓间质干细胞仅表达髓繇来源标志BST-1 mRNA，诱导1l天细 胞表达BST-1 BST-1、GST-P和M2一PK mRNA mRNA的表达消失，成熟脬细胞标志Albumin 的表达出现，而成熟肝细胞标志另一L．PKmRNA则始终未见表达。与前期研究 缭嘿撩赞。