p21(cip1%2fwaf-1%2fsid1%2fcap20)在大鼠移植静脉中表达及意义.pdf

中文摘要 前 言 静脉中的表达规律，分析p21对血管平滑肌细胞增殖的影响，为下一步转染 1提供理论基础并为从分子水平防治移植静脉再狭窄提供帮助。 p2 方 法 1．动物模型建立 6只。取O．5厘米长自体颈静脉移植到同侧颈总动脉上，分别于术后l、7、 14、21、28、42．天切取移植静脉及对侧正常动、静脉，进行下列检测。 2．指标检测 析仪测量内膜，了解内膜增生隋况。 的动态变化及血管平滑肌细胞增殖情况，分析p21表达对血管平滑肌细胞 增殖的影响。 mRNA进行半定量检测，观察同上。 RT．PCR：对p21 (3)p2l 3．免疫组化观察方法及统计学分析 4-s表示，所 记数阳性细胞所得数据用阳性率(％)表示，每组数据以i 11．0下进行处理，经方差分析及t检验，P0．05有统计学 有数据在SPSS 意义。 结 果 术后14天，移植血管出现增生的内膜，28天时，血管内腔面基本完成 内皮化，内膜增厚明显。 正常动、静脉血管细胞中未见p21蛋白阳性表达，而实验组第1天可见 少量p21表达阳性细胞并随时间增加。到第2l天，p21在接近一半内膜细 胞中表达，主要集中在较底的内膜区域内，阳性细胞百分比达46．2±5． 正常动脉和静脉无p2l mRNA开始少量表达 mRNA表达。术后1天组，p21 mRNA表达达到高峰，与术后14天组和28 并逐渐增多。术后2l天时，p21 mRNA表达开始下降。后者与 天组比较，差异显著(P0．05)。随后，p21 p21蛋白变化趋势一致。 正常动、静脉平滑肌细胞仅极少量呈PCNA染色阳性。术后1天，移植 静脉可见PCNA阳性细胞。术后7天时，移植血管平滑肌细胞增殖达到高 性细胞数迅速降低，42天时下降已很明显(6．6±0．7％)。 讨 论 驱动细胞周期，CDI能竞争性地与edk结合，抑制其活性，从而调整细胞周 sidl／eap20。 本实验结果显示PCNA阳性细胞在术后第1天即出现并迅速增加，术 缓慢增加，术后第7天表达达到一定水平后PCNA阳性细胞数迅速下降。 当p21在术后第21天表达达到高峰时，PCNA阳性细胞数下降已很明显， mRNA表达变化趋势与 提示二者之间具有相关性。另外，本研究显示p21 p21蛋白表达一致，提示p2l调节可能位于mRNA水平。 综上所述，静脉移植后1～2l天，内源性p21以一个增加的水平表达并 ·2· 与PCNA及内膜细胞增殖下降相联系。这一发现提示p21在静脉移植早中 期表达并自然地发挥作用诱导内膜细胞增殖停滞。但这时血管平滑肌细胞 已大量增殖，内膜增厚。本实验结果提示如将p21作为靶基因在静脉移植 时试行转染移植静脉使之早期表达，可能抑制血管平滑肌细胞增殖，从而提 供一种治疗移植静脉再狭窄的方法。 结 论 水平表达，3周后下降。内源性p21表达增加与PCNA及血管平滑肌细胞 增殖下降相联系，可能自然地发挥作用诱导内膜细胞增殖停滞。可作为靶 基因试行转染移植静脉，抑制血管平滑肌细胞增殖。 关键词：自体静脉移植；再狭窄；细胞周期；血管平滑肌细胞；逆转录聚 合酶链反应 ·3· of Ex