血红素丙酸基甲酯化细胞色素b_5及F58位突变体蛋白研究.pdfVIP

第49 卷 第 14 期 2004 年 7 月 论 文 血红素丙酸基甲酯化的细胞色素b5 及其F58 位 突变体蛋白的研究 苏 晖 陆君霞 王韵华 任 毅 谢 毅 黄仲贤* (复旦大学化学系化学生物学实验室, 上海200433. * 联系人, E-mail: zxhuang@) 摘要 为了进一步认识Phe58 与血红素b 之间芳环堆砌相互作用对蛋白质结构稳定性和性质影响的本 质, 我们将Cyt b5 和它的突变体F58Y, F58W 蛋白的血红素丙酸根进行了甲酯化, 考察丙酸根参与的氢 键网络是否对Phe58 与血红素的-相互作用有影响. 各种谱学和反应的研究表明, 野生型及58 位突变 体蛋白甲酯化后, 58 位芳环与周围芳环之间的堆积作用仍然存在, 但由于替代氨基酸残基的体积、疏水 性及形成氢键能力等方面性质不同, 对蛋白的稳定性产生了一定的影响. 关键词 细胞色素b5 芳环堆砌作用 甲酯化血红素 细胞色素b (cytochrome b , Cyt b )是一个含血红 Cyt b F58 的突变体蛋白F58Y 和F58W. 同时, 将血 5 5 5 5 素 b 的膜结合蛋白. 实验已经证明, 生物体内的细 红素丙酸根进行了甲酯化, 以排除丙酸根与肽链间 胞色素 b5 先在细胞内质网上合成脱辅基蛋白, 然后 氢键的影响, 以使一方面突出这些不同Phe58 突变体 在线粒体外膜中完成血红素 b 的合成并插入 apo 蛋 中, -相互作用变化的影响; 另一方面考察有丙酸 白, 组装成完整的细胞b . 蛋白质这些反应的驱动力 根参与的氢键网络是否对 Phe58 的-相互作用有影 5 是肽链和辅基之间的氢键相互作用, van der Waals 相 响. 本文报道用紫外-可见光谱、圆二色散光谱研究甲 [1] 互作用以及各种疏水相互作用等 . 因此, 血红素辅 酯化Cytb (DME-Cyt b )和它的F58Y, F58W 突变体蛋 5 5 基上的各取代基以及血红素疏水腔中各氨基酸残基 白的热变性过程. 各种甲酯化细胞色素b5 与脱辅基 的性质, 在诱导蛋白质的正确折叠与组装、维持蛋白 肌红蛋白之间的血红素转移反应. 研究表明, 野生型 质功能结构中起着非常关键的作用. 为了阐明一些 及58 位突变体蛋白甲酯化后, 虽然58 位芳环与周围 关键的或保守的氨基酸残基的具体作用和影响, 本 芳环之间的堆积作用仍然存在, 但由于替代氨基酸 研究组对不同位置的残基做了一系列定点突变研究, 残基的体积、疏水性及形成氢键能力等方面性质不 发现细胞色素b5 蛋白肽链和血红素b 之间的氢键、轴 同, 对蛋白的稳定性产生了一定的影响. 向配位以及疏水相互作用等因素, 都影响着蛋白质 1 实验 [2] 的构象稳定性和氧化还原电位等性质 ; 同时也注意 ( ⅰ) 细胞色素b5 血红素甲酯化衍生物(DME-Cyt 到了血红素疏水腔内残基芳香环的堆积作用、血红素