细菌初步鉴定及记录格式.docVIP

细菌的初步鉴定 启动条件 1、目地样坏包 同一取样原因出现坏包，如表现性状相同，则取其中任意1—2包进行细菌初步鉴定，如表现性状不同，则对不同表现性状坏包分别取其中任意1—2包进行细菌初步鉴定。 不同取样原因出现坏包，则按坏包的取样原因、表现性状分别取其中任意1—2包进行细菌初步鉴定。 2、随机样坏包 同一时段出现坏包，如表现性状相同，则取其中任意1—2包进行细菌初步鉴定，如表现性状不同，则对不同表现性状坏包分别取其中任意1—2包进行细菌初步鉴定。 不同时段出现坏包，则按坏包的时段、表现性状分别取其中任意1—2包进行细菌初步鉴定。 3、坏包产品的包装无明显破损。 4、未由微生物污染引起的坏包：酶类及化学反应用不同的查验方式。 备注：坏包表现性状指酸包、胀包、苦包或其它的表现性状。 坏包样品的处理、准备 1、已开包的坏包（酸包、苦包等） 检测时发现产品感官及PH值有明显变化时，需快速将坏包产品的内容物移入无菌容器内（移入时需用75%的酒精棉对操作员手及开包产品的移出口进行擦试灭菌），并及时检测。如不能及时检测，需冷藏保存2小时内进行检测。 未开包的坏包（胀包等） 使用75%酒精棉对样品外表面擦试消毒后放于超净台内待检。检测时，以无菌操作在无横纵封处剪一半圆或三角取样。 坏包微生物培养检测（划线、接种培养） 低酸产品：主要检测细菌总数、芽孢总数、耐热芽孢，必要时增加霉菌、酵母菌、乳酸菌。 高酸产品：主要检测细菌总数、霉菌、酵母菌、乳酸菌。 1、细菌总数 采用无菌手续取1ml样品接种于培养皿中，倾倒冷却至46℃左右的普通营养琼脂培养基约15ml后于36±1℃条件下培养48小时；另以无菌操作使用接种环于提前备好的普通营养琼脂培养基平板上作划线，培养条件同上（36±1℃/48h）。同时做一相应普通营养琼脂培养基细菌总数的空白对照试验。 2、芽孢总数、耐热芽孢 以无菌操作取10ml样品于两个灭菌小试管中，分别在80℃和100℃的水浴中加热10min。待样品冷却后，采用无菌手续分别取1ml样品接种于培养皿中，倾倒冷却至46℃左右的普通营养琼脂培养基约15-20ml后，分别于36±1℃/72h、55±1℃/72h条件下培养；另以无菌操作使用接种环于提前备好的普通营养琼脂培养基平板上作划线，培养条件同上（36±1℃/72h、55±1℃/72h ）。同时做一相应普通营养琼脂培养基芽孢总数、耐热芽孢的空白对照试验。 3、霉菌、酵母菌 采用接种环以无菌手续于专用培养基上作划线培养，另采用1ml吸管以无菌操作，接种1ml样品于专用培养基中培养。（条件25—28℃/5天） 记录样品：名称、批号、取样原因、时间、样品感官、PH值、酸度、气体形成、包装密封性、凝块、分离等。 初步粗略鉴定：（一一对应） 1、菌落形态记录：此时计数不重要，观察单一菌丛还是混合菌丛。 a、大小：1mm为露滴状菌落,1-2mm为小菌落, 2-4mm为中等小菌落,4-6mm大菌落,6mm为巨大菌落。 b.形状：圆形、不规则状，假根状等。 c.隆起度：扩展，台状、低凸状、乳头状等。 d.菌落边缘：边缘整齐、锯齿状、毛刷状等。 e.表面性状：光滑、褶皱、同心环状等。 f.表面光泽：金属光泽、腊状等。 g.颜色透明度：透明、半透明、不透明等。 H、气味、湿润度、颜色等其他。 2、鉴别： （1）、初染：选取不同形态的单一菌落。属阴性染色，微生物不着色，在黑背景处观察清晰、闪亮点 鉴别：球菌、杆菌。G—菌易扭曲变形，造成鉴别困难 方法：滴一滴苯胺黑（2%水溶液）或结晶紫染液于载玻片上，用接种环挑取少量菌于涂液的载玻片处,完全涂匀。待自然干燥后,滴香柏油,使用显微镜的油镜观察。 （2）、G染色 a、球菌：对于球菌，不一致需要G染色，因为G—球菌不会成为液体食品中的腐败菌，可直接进行H2O2酶实验。鉴别H2O2酶阳性、阴性球菌。 B、杆菌：需进行G染色，鉴别G— 或G+，有无芽孢形成。 1、G染色固定的目的：①防止菌落被水冲掉 ②杀死细菌，固定菌落结构。②改变细菌对染液的通透性。 2、媒染：增强染液与菌体间的作用力。 3、脱色：测知燃料与被染物之间结合的牢固程度，具有鉴别细菌的作用。 G+C壁主要由肽聚糖组成；着色能力强。 G－C壁主要由磷脂、脂多糖组成；着色能力弱。 脱色时间控制：时间长：G+→G－ 时间短：G－→G+ 4、复染：使已脱色的菌体重新染上与前染液颜色成明显对比的颜色。 （3）、H2O2酶试验： 是一个裂解H2O2，产生O2的过程。鉴别H2O2酶试验阴性或阳性的G+杆菌。 方法：滴一滴10%的H2O2溶液于载玻片上，使用接种环挑取少量与菌落形态、初染、G染色均对应的菌落，于涂有H2O2的载玻片，完全涂开观察。 结果：有