粗毛栓菌诱变菌株SAH-12漆酶分离纯化及酶学性质的研究.pdfVIP

维普资讯 菌 物 学 报 26(4)：539—548，2007 Mycosystema 粗毛栓菌诱变菌株SAH-12漆酶的分离纯化及酶学性质研究 黄乾明 杨婉身 卜 陈华萍 张寒飞 刘一江 谢君 (四川I农业大学生命科学与理学院 雅安 625014； 华南农业大学测试中心 广州 510642) 摘 要：粗毛栓菌 Trametesgallica诱变菌株 SAH-12是通过紫外诱变选育所得的漆酶高产菌株 ， Active—PAGE分析表明SAH-12在高氮低碳无机盐培养液 (LM3)中至少分泌3种漆酶同工酶(Lacl、Lac2、 Lac3)。采用硫酸铵盐析、透析和 Sephadex—G75分子筛层析从其培养液中分离纯化得到电泳纯的Lac1， 纯化倍数 6．54，酶活性回收59．7％。Lacl经 SDS．PAGE验证为一条带，其表观分子量为61．5kDa。Lac1 为一种糖蛋白，含糖量 11．6％，等电点pI4．40，催化氧化底物 ABTS的最适反应温度为60℃，最适 pH 为2．6，Km值为25~tmol／L。Lac1在40C (pH4．0)以下和pH1．5～5．0(28~C)范围内稳定。金属离子Fe2+、 A 、Hg和c 与抑制剂DTT、SDS、EDTA和DMSO对Lacl有抑制作用，其中Fe2+和DTr完全抑制 酶活，而cu对酶有明显激活作用，Mn2+、Zn对酶活影响不大。Lacl不仅可使一些合成染料明显脱色， 而且对苹果汁多酚祛除也有较好效果。40℃用该酶 (1U／mL)处理苹果汁5h，其多酚含量可降低40％。 关键词：合成染料，脱色，苹果汁，多酚 中图分类号：Q939．5 文献标识码：A 文章编号：1672—6472 (2007)04—0539-0548 PUrifiCatiOn and CharaCteriZatiOn of a Iaccase frOm the mutatedstrainSAH-12ofTrametesgallica HUANG Qian—Ming YANG Wan—Shen CHEN Hua-Ping ZHANG Hna—Fei LIU Yi—Jina g XIE Jun (1CollegeofL~ieSciences，SichuanAgriculturalUniversity,Ya’an625014，China；。InstrumentalAnalysis＆ResearchCenter, SouthChinaAgriculturalUniversiyt,Guangzhou510642，ChinaJ Abstract：Laccasehigh-yielding strainSAH-12ofTrametesgallica wasobtainedbyUV mutagenesis．Three isoenzymesoflaccase(viz．Lac1，Lac2andLac3)wereobtainedintheculturesolutionofSAH一12，amongwhich Lac1ofelectrophoretichomogeneity was purifiedbyhtestepsofammonium sulfateprecipitation，dialysisand SephadexG-75chromatography．Purificationofabout6．54foldwas achievedwiht na overallyieldof59．7％． ThemolceularweightofpurifiedLac1was estimatedtobeabout61．5kDabySDS—PAGE．Itwasaglycoprotein wiht carbohydratecontentof 11．6％．The isoelcetricpointwas 4．40 (room temperature)．Theoptimum 基金项 目：四川省教育厅重点科研项 目(No．2002A009，No．2004A026)；四川省科学技术厅应用基础项 目(No．04JY029—032) 四川I农业大学青年科技创新基金 (No 通讯作者Correspondingaut