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第23卷第 1期 高 校 化 学 工 程 学 报 No．1 、，0123
2009 年 2月 JournalofChemicalEngineeringofChineseUniversities Feb 2009
文章编号：1003·9015(2009)01—0092．07
拟热带假丝酵母中羰基还原酶的纯化及其酶学性质研究
解 晴 ，吴坚平 ，林 立 。，徐 刚’，杨立荣
(1．浙江大学 化学工程与生物工程学系 生物工程研究所， 浙江 杭州 310027；
2．江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214036)
摘 要：从拟热带假丝酵母 Candidapseudotropical~s104(C104)中，通过离子交换层析和蓝色琼脂糖亲和层析分离得到
依赖于辅酶NAD(H)的羰基还原酶，酶的分子量约为 375kD。催化氧化反应的最适 pH为 8．5，催化还原反应的最适
pH为 6．0--6．5，最适反应温度均为 50C。该酶热稳定性较低 ，在 pH7．0—8．5环境下较稳定，多数重金属离子均能导致
酶活力下降 该酶的反应底物广泛，能高选择性催化还原多种氯代苯乙酮衍生物，其中还原苯 乙酮、2-氯．苯 乙酮、3．
氯．苯乙酮和 4-氯．苯乙酮可产生对应的 S型醇，其对映体过剩值(P．e)均达到将近 100％。底物上取代基团的位阻效应
和电荷诱导效应是羰基还原酶还原底物活力大小的重要影响因素 。
关键词：羰基还原酶；选择性还原：拟热带假丝酵母 ：分离纯化
中图分类号：Q5549：Q814．1 文献标识码 ：A
PurificationandCharacterizationofaCarbonylReductase
from CandidaPseudotropicalis
XIEQin一，wuJian．ping一，LINLi，XUGang，YANGLi．rong
(1．DepartmentofChemicalnadBiochemicalEngineering，ZhejiangUniversity,Hnagzhou310027，China
2．TheKeyLaboratoryofIndustrialBiotechnology,MinistryofEducation,JinagnanUniversity,Wuxi214036，China)
Abstract： AnNAD(H)．dependentcarbonylreductasewaspurified行omCandidapseudotropicalisl04(Cl04)
with DEAE ion exchnagechromatogram andbluesepharoseaffinity chromatogram ．Therelativemolecular
weightoftheenz3，me wasestimatedto be 37．5kD through SDS—PAGE．TheoptimalpH forenzymatic
oxidationandreduction are 8．5 and6．0~6．5．respectively,nadtheoptimal temperatureofrbothenzymatic
reactionsiS50℃．TheenzymeiSStablebelowthetemperature0f30℃ andat pH between7．0and8．5Common
heavymetaIionsinhibittheenyz meactivity．Thecrabonylreductaseshowstohaveabroadsubstratespecificity
andhighenantioselectivity．TheenzymeCna catalyzethereductionofacetophenoneand itsderivatives，suchas
2-chloroacetophenone，3 chloroacetophenone，4．chlOrOacetOphenO
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