青、草、鲢、镰四大家鱼的血红蛋白和红细胞乳酸脱氢酶同工酶分析 1).pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing) 8(2)25-271986 青、草、FJlt 四大家鱼的血红蛋白和 红细胞乳酸脱氢酶同工酶分析’‘ 阎景智 王国恩2)严绍颐 （中国科学院发育生物学研究所，北京） 过去对物种的分类一般沿用形态特征的比 述生理盐水洗2次。按红血球体积的1-1.5体 较分类法。随着生物学中各种新技术的应用及 积加无离子水，振荡破碎红血球。然后再在40C 各学科间的相互渗透，用生物化学等方法来鉴 以每分钟3,000转离心30分钟。所得红色透 别物种的特异性和它们在进化上的亲缘关系已 明的上清液即含Hb及各种酶。 日益多见[1,［73。 特别是对某些基因的特定产物 （二）淀粉凝胶的制备 所用的淀粉是 — 一些特异性蛋白和酶有了可靠的鉴别方 加拿大 C（onnaughtLaboratorisLimited,Ontario, 法，所以它们已被用于鉴别生物遗传特征或器 Willowdale）出品‘的马铃薯水解淀粉。凝胶按 官特异性的标记s1［0 12外的浓度 (W/V）配制。电极缓冲液为Tris-_ 血红蛋白H（b）和乳酸脱氢酶 (LDH）同 硼酸缓冲液，pH8.7。把配好的淀粉液加热，待 工酶均为特定基因的产物，并在其分子结构的 淀粉液成透明糊状并出现气抱时立即离开火 不同水平上显示某些种类或器官特异性[2,4,5,730 焰，减压抽气2分钟，倒在电泳槽内，将预热到 在鱼类中，研究Hb和LDH同工酶的电泳图谱 8‘0℃左右的玻璃板迅速盖在胶液上。室温冷凝 已有若干报道(8,9,107本文主要是用淀粉凝胶电泳 后放到4℃冰箱里继续冷却2小时以上。凝胶 法分析了青、草、继、缩四种鱼的Hb和红血细 厚约5mm，面积为30X17.5cmzo 胞 LDH 同工酶的电泳行为特征，以便在生化 三（）电泳 在上述离心好的万清液中 水平上进一步为形态分类提供佐证。 取样，每孔点样25川。点样后用凡士林油封好 点样孔。用美国出品的 Buehler3-1500电泳仪 材 料 和 方 法 在4℃的冰箱里进行电泳。 电泳时间为 16小 青鱼 M（ylopharyngodon 沙。，）、草鱼 时左右。电压梯度为mV-/0?,c1 (Ctenopharyngodonidellus), 鱼 H（ypophthal- （四）染色 电泳后，Hb的谱带即出现， mickt妙 molitrix）和缩鱼 A（ristic抑；nobilis) 应马仁拍照记录。取下胶片，按纵向用镍铬丝 均为取自北京西郊万泉庄渔场的两年龄以上的 成鱼。每种鱼取10尾。 YanJingzhieta1:AnalysisofStarchGelElectra- phoresisPatternsofHemoglobin andRedBlood （一）Hb和LDH同工酶的提取 主要 CellLDHIsozymesofFourKindsofFreshWater 参考牛满江等的方法闭，并做了某些改进。用 Telcost(Mylopharyngodonpiceus,Ctenopharyngo- donidellus,Hypophthalmichthysmolittix,Arisu- 灭菌的注射器从鱼尾静脉取血1-2ml，放在预 ）chthy，nobiiis), 先盛有5ml含0.1务肝素的生理盐水的刻度离 1)山东大学1983届毕业生郑小民、卢清显参加了部分工 作。 心管中，用 K,型离心机 东（德产