中国对虾抗WSSV相关基因表达特征的DDRT-PCR分析.pdfVIP

第 17卷第2期 中国水产科学 V01．17 No．2 2010年 3月 JournalofFisherySciencesofChina March 2010 中国对虾抗 WSSV相关基因表达特征的DDRT—PCR分析 赖晓芳 一，孔杰 ，王清印 ，王伟继 (1．中国海洋大学 海洋生命学院，山东 青岛 266003；2．中国水产科学研究院 黄海水产研究所，山东 青岛 266071；3．淮海工 学院海洋学院，江苏 连云港 22：2005) 摘要：为了分析中国对虾 ( aneropenaeuschinensis)抗 白斑综合征病毒 (wssv)相关的分子机理，本研究以中国对虾 “黄 海2号”作为实验材料 ，进行 白斑综合征病毒感染实验 ，感染 20d后获得了59尾存活的对虾。采用mRNA差异显示技 术 (DDRT—PCR)分析感染实验中早期濒死中国对虾和感染 20d后仍存活对虾基因表达的差异 ，共回收到46个阳性差异 片段。差异片段序列同源性功能分析的结果表明，差异片段所编码的蛋白主要参与氧化磷酸化、蛋白质合成、糖酵解、信 号转导等生物过程。以上结果初步反映了中国对虾抗 门斑综合征病毒相关基因的表达特征 ，为研究对虾抗 白斑综合征 病毒的作用机制及培育抗 自斑综合征病毒对虾新品种提供了基础数据。[中国水产科学 ，2010，17(2)：193—200】 关键词：中国对虾；抗 白斑综合征病毒 ；mRNA差异显示技术 ； 中图分类号：$945．4 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—8737一(2010)02—0193—08 对虾 白斑综合征是一种 由白斑综合征病毒 经分别从斑节对虾 (Penaeusmonodon)和 日本对虾 (whitespotsyndromevirus，WSSV)引起的高度传染的 (Marsupenaeusjaponicus)中克隆了在人工感染 WSSV 病毒疾病 ，1992年最早爆发于中国台湾，目前已成为 早 期表达 量上调 的RabGTPase“、Tn11receptor~川、 威胁对虾养殖业 的主要疾病 lfl~WSSV的致病性极 Pm．fortilin【引 【6。 focaladhesion kinasel17| 、 caspase 、 、 强且宿主几乎覆盖了所有的甲壳动物，至今生产上未 PmAV“等基因。以上这些基因表达的研究都是在 找到治疗或完全阻止该病毒传播的方法 ；另外， 人工感染WSSV72h之 内取材，属于对WSSV急性 由于对虾属于无脊椎动物，其免疫防御属于非特异性 感染后对虾应急反应的分子机理研究范畴，然而绝大 免疫，因此，如何从对虾 自身寻找其与抗WSSV相关 多数对虾通常在感染WSSV后 3～10d死亡 ，因 的分子基础并为WSSV引起的病害提供分子生物学 此有必要延长取材的时间范围，以便更好地阐释对虾 依据 ，进而从根本上防控WSSV引起的病害问题已成 抗WSSV的分子机制。我们在实际研究中发现，在中 为当前的研究热点之一。AFJJP 、RAPD吲及 SSR 国对虾WSSV病毒感染后，有些很快发病死亡，而有 先后在 DNA水平用于分析中国对虾 (Fenneropenaeus 些多达 20多天仍然未死亡 ，因此研究这两类对虾问 chinensis)抗WSSV相关的分子基础，筛选与抗WSSV 的基因差异表达隋况，对于揭示对虾抗WSSV的分子 相关的分子标记及 QTL定位。另外，在基 因表达 机制意义重大。为了更好地探讨对虾抗WSSV作用 水平上，已经采用cDNA微阵列 [7-81-,mRNA差异显 的分子机制，以及建立发展抗WSSV的中国对虾分子 示阳、抑制性差减杂交 “ 和表达序列标签 “等方 标记辅助育种技术提供理论依据，本研究采用mRNA 法来研究抗WSSV相关基因的表达特征，如 目前已