绵羊Myostatin基因真核表达载体构建及在其原代成纤维细胞中瞬时表达.pdfVIP

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2017-08-30 发布于安徽
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绵羊Myostatin基因真核表达载体构建及在其原代成纤维细胞中瞬时表达.pdf

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· · 生物技术中国畜牧兽医年第卷第期２０１２３９５　１４绵羊基因真核表达载体的构建及在其Ｍｏｓｔａｔｉｎｙ原代成纤维细胞中的瞬时表达，１２３４２２２３１１２，，，，，，，，，陆健宋正海吕延飞赵福平张莉魏彩虹范广习丁家桐李碧春杜立新（，；，扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州中国农业科学院北京畜牧兽医研究所国家畜禽分子遗传１．２２５００９２．　，；，；，）育种中心北京苏州市吴中区东山动物防疫站江苏苏州德州市畜牧兽医局山东德州１００１９３３．２１５１２８４．２５３０１５　　　：（），摘要ＭｏｓｔａｔｉｎＭＳＴＮ基因是胚胎期肌肉形成和出生后骨骼肌生长的主要调控因子之一通过抑制肌细胞的扩增和分ｙ。，化而调控肌肉的生长和发育为了进一步揭示ＭＳＴＮ在绵羊成纤维细胞中的生物学功能采用ＲＴＰＣＲ从绵羊肌肉组织中－，，（）扩增ＭＳＴＮ基因将其ｃＤＮＡ终止密码子ＴＧＡ删除采用定向克隆技术连接到带有水母绿色荧光蛋白ＡｃＧＦＰ报告基因的，，／、，真核表达载体ＡｃＧＦＰＮ１中构建融合蛋白重组质粒经ＸｈｏＳａｃ双酶切测序鉴定后用脂质体介导质粒转染绵羊原ｐ－ Ⅰ Ⅱ ，、。，代成纤维细胞观测荧光表达及用ＲＴＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎ方法检测基因转录蛋白质表达情况结果表明成功克隆绵－　ｇ，，羊ＭＳＴＮ基因通过ＰＣＲ方法在ＭＳＴＮ阅读框两端引入了Ｘｈｏ和Ｓａｃ克隆位点成功构建ＡｃＧＦＰＭＳＴＮ融合蛋白真