HIV-1 Gag蛋白在大肠杆菌表达系统中诱导和纯化条件优化.pdfVIP

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2017-08-30 发布于安徽
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HIV-1 Gag蛋白在大肠杆菌表达系统中诱导和纯化条件优化.pdf

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生物工程学报 Chin J Biotech 2008, July 25; 24(7): 1306-1311 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 技术与方法 HIV-1 Gag 蛋白在大肠杆菌表达系统中诱导和纯化条件的优化傅晶晶, 孙静, 陈佩, 霍烛, 范文玲, 郝彦玲, 刘勇中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心传染病防治国家重点实验室, 北京 100050 o 摘要: 为探讨诱导温度对于HIV-1 Gag 在大肠杆菌中表达产物状态以及尿素浓度对蛋白纯化效果的影响, 将30 C 和 37o o C 诱导表达的包涵体分别溶于不同浓度的尿素, 比较溶解性的差异, 并比较复性的不同。将30 C 诱导的目的蛋白分 o o 别用2 mol/L 和8 mol/L 尿素溶解后做层析分离, 比较两者的分离效果。结果发现, 与37 C 相比, 30 C 诱导表达的蛋白能有效溶于低浓度尿素, 并且更容易复性。与8 mol/L 尿素溶解相比, 30oC 诱导的包涵体用2 mol/L 尿素溶解后通过凝胶过滤和离子交换层析纯化能得到更好的分离效果。这提示低温诱导的 Gag 包涵体中可能含有更多类似天然态构象的蛋白, 而低浓度尿素有利于保持包涵体中蛋白的天然态构象。从而为包涵体蛋白的诱导表达和分离纯化提供了参考。关键词: HIV-1 Gag, 包涵体, 温度, 变性剂, 纯化 Optimization of Induction and Purification of HIV-1 Gag Protein in Escherichia coli Expression System Jingjing Fu, Jing Sun, Pei Chen, Zhu Huo, Yanling Hao, and Yong Liu State Key Laboratory for Infectious Diseases Prevention and Control, National Center for AIDS/STD Control and Prevention , Chinese Center for Disease Control and Prevention , Beijing 100050, China Abstract: To investigate the effects of induction temperature on the expression product and the impact of urea concentratio