奶牛流产鹦鹉热衣原体ompA基因的克隆与原核表达.pdfVIP

140 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ChineseJournalofZoonoses 2010，26 (2) 文章编号：1002—2694I2010)02—0140一O4 奶牛流产鹦鹉热衣原体ompA基因的克隆与原核表达* 宋竹青 ，邱昌庆 ，周继章 ，曹小安 ，蔺国珍 ，郑福英 ，宫晓炜 ，王光华 ，魏彦明 摘 要 ：目的 表达奶牛源鹦鹉热衣原体 ompA基 因，探索其作为诊断抗原的可能性 。方法 采用套式 PCR方法扩增 出 了奶牛源鹦鹉热衣原体 ompA基因完整片段 ，此扩增产物经过双酶切后克隆到表达载体 pGEX一4T_1中，转化大肠杆菌 BL21 (DE3)，经 IPTG诱导表达后采用 sD PAGE和Western—blot检测重组 目的蛋 白的表达结果。结果 重组蛋 白经奶牛衣原体 阳性血清鉴定正确 。结论 ompA基 因在原核表达系统 中得到正确表达。 关键词：鹦鹉热衣原体 ；ompA基 因；克隆；原核表达 ；奶牛 中图分类号 ：R374 文献标识码 ：A Cloningandprokaryoticexpression oftheompA geneofChlamydiapsittaciinCOWS SONG Zhu—qing’，QIU Chang—qing，ZHOU ji—zhang ，CAO Xiao—an ， LIN Guo—zhen ，ZHENG Fu—ying ，GONG Xiao—wei，W ANG Guang—hua ，WEIYan—uring (1．LanzhouVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences， StateKeyLaboratory0l，VeterinaryEtiologicalBiology，KeyLaboratoryofAnimalVirology ofMinistryofAgriculture，KeyLaboratoryofPublicHealthofMinistryofAgriculture，Lanzhou730046，China； 2．GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China) ABSTRACT：TheompA geneofChlamyiapsittaciinCOWSwasamplifiedbyPCR withprimersdesignedbasedonthosere— portedinGenBank．TheamplifiedompA genewasinsertedintothebacterialplasmidvectorpGEX一4T一1andthentransformed intoE．coliBL21(DE3)with IPTG induction．Thegenewasderivedfrom plasmidpMD18一T vectorandthensequenced．Itwas demonstratedthatthisrecombinantfusionproteinofapproximately68kD inmolecularmasswashighlyexpressedininclusion bodyandmorepureproteinswouldbeproducedafterpurification．Thefusionproteinspecificallyreactedwithpositiveseraof bovineChlamydiaasdemonstratedbyWesternblotting．Theseresultsindicatethatthisrecombinantfusionproteinshowsgood reactivit3andcouldbeusedtOdevelopthediagnostickitforbovineChlamydiaandgeneticengineeringvaccine． KEY WORDS：Chlamydiapsittaci；ompA gene；cl