猪带绦虫TSOL18特异性单克隆抗体的制备及其体外杀虫作用的研究.pdfVIP

畜牧兽 医学报 2010，41(2)：208213 AetaVeterinariaetZootechnicaSinica 猪带绦虫 TSOL18特异性单克隆抗体的制备 及其体外杀虫作用的研究 郭爱疆 ，吴 润 ，贾万忠。，刘 斌。，闰鸿斌 ，骆学农。，才学鹏 (1．甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070；2．中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学 国家重点实验室 农业部兽医公共卫生重点实验室 甘肃省动物寄生虫病重点实验室 ，兰州 730046) 摘 要：本研究 目的在于制备抗猪带绦虫 TSOL18单克隆抗体 ，并分析单抗对六钩蚴的杀伤作用 。采用 Sephadex G-10o纯化在毕赤酵母中表达 的猪带绦虫六钩蚴TSOL18蛋 白；纯化的蛋白免疫 BALB／c小 鼠，运用杂交瘤技术建 立能分泌抗 TSOI18单克隆抗体的细胞株 ；通过 ELISA叠加试验进行 mAb的抗原表位分析 ；采用问接 ELISA法 测定TSOL18单克隆抗体特异性及腹水效价；采用抗 TSOI18单克隆抗体对激活的猪带绦虫六钩蚴进行体外六钩 呦杀伤试验 ，观察单抗对猪带绦虫六钩蚴活力的影响。结果成功获得 12株稳定分泌抗 TSOL18单克隆抗体 的杂 交瘤细胞株 ，识别 2个不同抗原表位 ，不 同抗原表位的2株单克隆抗体腹水效价分别为 1×10、1×10。。抗体体外 六钩蚴杀伤试验结果证明，在有补体 的情况下，多抗和单抗作用 6d后 ，六钩蚴结构模糊 ，边缘不清晰。表明单抗对 六钩蚴有一定的杀伤作用 。 关键词 ：猪带绦虫六钩蚴 ；TSOL18；单抗 ；体外杀六钩蚴作用 中图分类号 ：$852．734 文献标识码 ：A 文章编号：0366—6964(2O10)02—0208—06 PreparationofAnti—TSOL18M onoclonalAntibodiesandTheirEffectoN Taeniasolium Oncospheres GUOAi—jiang ，WU Run，JIAWan-zhong2，LIUBinz，YANHong-bin2， LUO Xue-nong ，CAIXue-penga (1．CollegeofVeterinaryMedicine，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China； 2．KeyLaboratoryofVeterinaryParasitologyofGansuProvince／KeyLaboratoryofVeterinary PublicHealthofMinistryofAgriculture／StateKeyLaboratoryofVeterinaryEtiologicalBiology， LanzhouVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Lanzhou730046，China) Abstract：MAbsagainstTaeniasoliurn TSOL18werepreparedand theirinvitroeffectononco— sphereswasanalyzed．TSOL18expressedinPichiapastoriswaspurifiedwithSephadexG一100； mAbswerepreparedbyhybridomatechniqueusingpurifiedTSOL18asan immunogen；Antigen epitopesweretested by ELISA adding test；Specificity and titerofthemAbswasdetermined usingindirectELISA ：TheeffectofthemAbsononeosphereswastestedby ”vitrooncospheres— killingtest．Twelvehybridomacelllineswer