人脐带间充质干细胞的分离培养及向成骨成脂分化的实验研究.pdfVIP

第31卷第2期 西 安 交 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) Vo1．31No．2 2010年 3月 JournalofXi’anJiaotongUniversity(MedicalSciences) M ar．2O10 人脐带间充质干细胞的分离培养及 向成骨成脂分化的实验研究 孙 国栋，李志忠，王 晶，林永新 ，洪 亮，吴波文，焦根龙 ，邵建立 (暨南大学附属第一医院骨科 ，广东广州 510632) 摘要 ：目的 探讨并优化人脐带间充质干细胞 (huCMscs)体外获取及培养增殖的方法并鉴定；诱导其 向成骨细胞和 脂肪细胞分化 ，为其进一步应用奠定基础 。方法 用酶消化法分离培养 hUCMSCs，通过传代培养 、扩增 ，倒置光学显 微镜及原子力显微镜下观察细胞形态 ；MTT法检测细胞增殖曲线，流式细胞仪检测免疫表型；体外 向成骨 、脂肪方 向 诱导分化 ，并通过特异性染色鉴定其分化能力 。结果 采用酶消化法能有效分离纯化 hUCMSCs。接种 24h，贴壁细 胞形态多为长梭型、多边形或成纤维细胞样形态 ，大小均一 。P3、P7代细胞 的生长 曲线基本一致 ，增殖能力强。流式 细胞仪分析，第 3代细胞强烈表达 CD29、CD44、CD105，不表达 CD34、CD45和 HLA～DR。经成骨诱导分化后 4周 ，碱 性磷酸酶染色呈强阳性，茜素红染色可见 明显钙结节 ；经成脂诱导 3周 ，油红 O染色呈阳性，有明显的脂滴 出现 。 结论 本实验建立了一套体外稳定培养扩增 hUCMSCs的方法 。所培养的细胞成分单一 、扩增迅速 、生物学形状稳 定 ，并能使其在体外诱导 向成骨细胞和脂肪细胞分化 ，有望成为组织工程较为理想的种子细胞。 关键词 ：脐带 ；间充质干细胞 ；分化 ；成骨细胞 ；脂肪细胞 中图分类号 ：R318．0 文献标志码 ：A 文章编号 ：1671-8259(2010)02—0143—05 Isolation，cultureandidentificationofmesenchymalstem cells from humanumbilicalcordaswellastheirosteogenic andadipogenicdifferentiation SUN Guo-dong，LIZhi—zhong，WANG Jing，LIN Yong—xin， HONG Liang，WU Bo—wen，JIAO Gen—long，SHAO Jian—li (DepartmentofOrthopedics，theFirstAffiliatedHospitalof JinanUniversity，Guangzhou510632，China) ABSTRACT：Objective Toestablishanoptimizedmethodtoisolate，cultureandidentifyhumanumbilicalcord mesenchymal stem ceils (hUCMSCs) in vitro and induce their osteogenic and adipogenic differentiation． Methods ThehUCMSCswereisolatedfrom humanumbilicalcordbydigestionwithcollagenase．Afterseria1 subcultivation in vitro，thestem cellswerepassaged．M orphologicappearanceofhUCM SCswaso