动物染色体C带技术的改进研究.pdfVIP

维普资讯 · 398 · 山西医药杂志2008年 5月第37卷第5期 ShanxiMedJ，May2008，Vo1．37，No．5 动物染色体C带技术的改进研究 华北煤炭医学院 (063000) 高 爽 李萌萌 摘【 要】 目的 对动物染色体c显带技术加以改进，建立一套简便而有效的动物染色体 c带技术。方法 取雄性蝗虫双侧精巢，一侧采用传统方法，即无常规染色，冰冻揭片法揭片，再进行C带处理；另一侧采用改进 方法，石炭酸品红常规染色，液氮揭片法揭片，再进行 c带处理，显微摄影并记录C带结果。结果 采用传统方 法，c带处理后的制片往往无分散较好的中期分裂象，造成了时间和药品的浪费，且揭片后样本多残留在盖玻片 上，造成染色体丢失；采用改进方法，染色清晰，褪色彻底，揭片后无样品丢失现象。结论 采用石炭酸品红进行 常规染色、液氮揭片法揭片这种改进的c带技术优于传统的c带技术。 【关键词】 c带技术； 冰冻揭片； 液氮揭片 C带技术(C—bandingtechnique)是使结构异染色 约 1～3mm，置于洁净的载玻片上。滴加一滴45％冰醋酸 质或高度重复的DNA着色，这种显带方法对染色体 使之软化，5～8min后盖上盖玻片，覆上滤纸，用拇指施 的着丝粒区和 Y染色体的长臂的观察十分有利。C 压。冰冻揭片法与褪染：把制片标本放在冰块上或放在冰 箱中冰冻 10min，用解剖刀揭去盖玻片。放置几分钟，然后 带核型因其较其他带形具有制片方法简单、重复性 浸在45％冰醋酸中，在 5～8℃下褪色 2O～30min。室温 高、一般借助光学显微镜即可观察等优点，在科学研 干燥 1周。取另一侧的精巢，在蒸馏水中剥离精巢周围的结 究中得到普遍应用…1。传统的动物染色体 C带的制 缔组织并分且离精细小管。取蝗虫精细小管的端部约 1～3 备都是压片后直接揭片，进行C带处理，没有常规染 mm，置于洁净的载玻片上。滴加一滴 45％冰醋酸使之软 色部分[2I3]。但这种方法在实际操作中存在很大的缺 化，5～8min后用滤纸吸干冰醋酸。用石炭酸品红常规染 陷，没有常规染色操作，就不能高效地首先选出染色 色 ：在样品上滴加一滴石炭酸品红染液，染色 15～20min， 体分散好的标本再进行C带制片，对于之后的C带处 盖上盖玻片，覆上滤纸，用拇指施压。将制片标本放在光学 理既是对药品的浪费，也是对时间的浪费，另外冰冻 显微镜下，镜检并记录结果。液氮揭片法与褪染：将制片标 揭片法去盖玻片使样本多粘在盖玻片上，进行褪染处 本置入金属器皿内，液氮冰冻，快速用解剖刀揭片。放置几 分钟。然后浸在 45％冰醋酸中，在 5～8℃下褪色 2O～3O 理时容易造成样本丢失而影响实验的继续进行，这些 min。室温干燥 1周。 缺陷给研究工作带来很多困难。本研究以蝗虫为实 1．2．3 C带处理：参考染色体 C带处理的改 良技术 【·】并 验材料，对传统的染色体制备方法加以改进，建立了 加以改进。在染色缸内注入饱和Ba(0H)2溶液，将干燥好 一 套简便而有效的C带技术。这一技术对于动物染 的制片标本浸入染缸，置于6O℃恒温水浴箱中，水浴 7～8 色体的研究具有重要意义。 min