含砷矿物药在体内存在形态的研究方法.pdf

药学学报990618 药学学报 ACTA　PHAEMACEUTICA　SINICA 1999年　第34卷　第6期　VOL.34　NO.6 含砷矿物药在体内存在形态的研究方法 袁倬斌 韩树波 朱敏 关键词　含砷矿物药；药效；毒性；形态分析 　　含砷矿物药数量较多，仅中国药典 1995版中含雄黄的复方就有23种之多。砷类药物如雄黄、雌 1］ 黄、砒石、砒霜、鬻石是这些复方药效的物质基础 ［ 。不同形态的砷毒性不同，如As3+毒性最大， 而As5+毒性降低为As3+ 的1.7%，甲基砷类毒性更弱，砷甜菜碱类和砷胆碱类则无毒。所以现在仍以总 砷的量作为毒性控制指标似不科学，也影响了含砷中药的出口，因此亟待研究含砷药物在体内外形态 的变化规律，在分子水平揭示其作用特点及安全性，创新性地建立其科学评价标准。其关键是生物体 尤其是人体内外砷的形态研究方法的建立，本文对其进行初步探讨。 1　砷在体内的存在状态 　　砷进入人体后，绝大部分先与血液中血红蛋白上的珠蛋白结合，少量与血浆蛋白结合，然后由血 液迅速到达肝、肺、肾、肠、脾、肌肉、骨骼及一些神经组织中。常人含砷约14～21 mg ，其中肌肉中 含0.04～0.09 μg. -1 . -1 . -1 . -1 g ，全血中含0.2～5.2 μg ml ，红细胞中约2.7 μg L ,脑组织中含0.012～0.10 μg g , 心脏组织含4.4～27 ng. -1 . -1 . -1 . -1 g ,肺组织含0.01～0.292 μg g ,肝组织含6.5～460 ng g ,脾脏中含3～32 ng g ,肾 脏中含0.05～0.35 μg. -1 . -1 . -1 g ,骨骼中含0.08～4.1 μg g ,头发中含0.3～5.74 μg g 。砷在体内可进行生物转 2,3 ］ 化，在酶催化下进行氧化还原、生物甲基化、生物合成等过程，产生多种砷的型体 ［ , 已经证实的 型体如表1所示。 2　生物体中砷的形态分析方法 　　砷的形态不同，其代谢机理与毒性也各异，因此近来生物体和环境样品中的砷形态测定已成为研 4～7 ］ 究热点之一 ［ 。这些形态测定方法可分为两大类。一类是痕量砷的形态分析方法，另一类是含砷 未知物的结构鉴定方法。　　 2.1　生物体中痕量砷化合物的形态分析方法 　　由于样品背景复杂，各种砷形态的含量太低等问题，现有的绝大部分检测手段均难满足直接测定 对灵敏度和选择性的要求，所以生物体中砷的形态分析需预先富集和分离后才能测定，基本步骤包括 样品采集、制备、保存、处理、有效成分的预富集、分离和检测等(Scheme 1) 。其中最重要的是分离、 富集和检测技术的选择，本文将作重点评述。 2.2　含砷未知物的结构鉴定 4,5,8～12］ 　　此类方法已多有报道 ［ 。操作步骤主要包括：(1)从大量样品中提取得到砷的形态。(2) 提取物的进一步纯化与分离。已报道的水溶性含砷化合物的分离与纯化方法有：凝胶渗透色谱(GPC)， 如采用Sephadex LH-20，G-20 ，G-15 ，G-10等树脂的色谱柱；离子交换色谱(IEC)，如采用二乙氨基乙 基、羧甲基类离子交换树脂的方法；薄层色谱(TLC)，如采用硅胶纤维素等材料的方法；高效液相色谱 (HPLC)，如GPC、硅胶、反相、离子交换等方法；毛细管电泳(CE)技术；脂溶性化合物的分离、纯化 有HPLC(GPC 、正相和反相)和GPC