三疣梭子蟹hyastatin抗菌肽原核表达的构建【毕业论文】.doc

本科毕业论文 （20 届） 三疣梭子蟹hyastatin抗菌肽原核表达的构建 专业：生物科学 目录 摘要 I Abstract II 引言 1 1 材料与方法 2 1.1 实验材料、试剂与仪器设备 2 1.1.1 实验材料预处理 2 1.1.2 实验仪器设备 2 1.1.3 实验试剂 2 1.1.4 引物 3 1.2 方法 3 1.2.1 三疣梭子蟹血淋巴细胞总RNA的提取 3 1.2.2 目的基因RT-PCR扩增 3 1.2.3 添加接头 4 1.2.4 扩增产物纯化 5 1.2.5 目的基因片段克隆载体的构建 5 1.2.6 pET-28a原核表达载体的构建 6 2 实验结果与分析 9 2.1 三疣梭子蟹血淋巴细胞总RNA的提取 9 2.2 目的基因扩增 9 2.3 克隆载体的构建 10 2.4 表达载体的构建 10 2.5 本章小结 12 3 讨论 13 3.1 目前常用的抗菌肽重组表达技术 13 3.2 抗菌肽在大肠杆菌中表达的影响因素和优化策略 13 参考文献 15 致谢 17 摘要 [摘要] 抗菌肽Hyastatin是Sperstad等2009年首次在蛛形互爱蟹(Hyas araneus)血细胞中纯化鉴定的一种对G+/G-菌、真菌均有抑制活性的新型抗菌肽其C端结构域与对虾抗菌肽Penaeidins同源也有6个保守的Cys 残基形成3 对分子内二硫键因此Hyastatin属于Penaeidins 家族抗菌肽。三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus) 血细胞与蛛形互爱蟹Hyastatin同源但结构存在显著差异的新型Hyastatin (命名为Pthyastatin) 抗菌肽全长cDNA 序列Pthyastatin的理化性质与生物学功能，本研究采用Trizol法提取三疣梭子蟹RNA，RT-PCRpET28a为表达载体、大肠杆菌Transetta和BL21两菌株为宿主细胞，采用原核表达体系表达重组抗菌肽rPthyastatin。研究结果表明：三疣梭子蟹总RNA的抽提、目的基因片段的RT-PCR扩增、克隆载体的构建、pET28a－rHyastatin表达载体的构建Pthyastatin的重组表达及抗菌肽Pthyastatin后续的理化性质及生物学功能研究奠定了良好的基础。 [关键词] 三疣梭子蟹；抗菌肽Pthyastatin；原核表达 Abstract [Abstract]：Sperstad and other antimicrobial peptides Hyastatin is the first time in 2009, Hyas araneus in the blood cells of a purified and identified on the G + / G-bacteria, fungi have the inhibitory activity of new antimicrobial peptide, the C-terminal domain and homologous peptide Penaeidins shrimp, there are six conserved Cys residues, forming three pairs of intramolecular disulfide bonds, so Hyastatin family of antimicrobial peptides are Penaeidins. In the previous study in our laboratory from Portunus trituberculatusin the blood cells are cloned to form a mutual love with the spider crab Hyastatin origin, but there are significant differences in the structure of new Hyastatin (Pthyastatin) full-length cDNA antimicrobial peptide sequence for the study of Pthyastatin physical and chemical properties and biological functions, this study extracted using Trizol portunus blood cell total RNA, RT-PCR amplification of the target gene to the expression vector pET28a, Escheric