丹参酮ⅡA等中草药有效成分与白蛋白结合反应光谱研究.pdfVIP

第21卷，第5期 光谱学与光谱分析 v01．21．No．5，pp694．696 Z2Q：王：2旦 鲨：：篮：22Z磐垡§盥：：：：：盆型￥：i： 生生=：：22： 丹参酮ⅡA等中草药有效成分与白蛋白结合反应的光谱研究 张立伟，杨频。，王芳 (山西大学分子科学研究所，山西太原030006) 摘要在口一环糊精存在的缓冲体系中，利用光谱法研究了丹参酮ⅡA等有效成分与人血清白蛋白(HsA)的 结合反应。结果表明：丹参酮ⅡA等与HsA结合后，紫外吸收有红移现象，且吸收强度增加；它们对}狂强的 荧光有较强的猝灭作用。根据Li煳v∞嗽双倒敷图，求得了它们与HsA的解离常数，基于硒捂河无辐 射能量转移机理，确定了它们的第一结合部位与HsA中214位色氪酸残基的距离。 主置词丹参酮ⅡA；隐丹参酮；人血清白蛋白；口一环糊精 中围分类号：0657．32文献标识码：A 文章编号：1000．0593(20(11)05—0694．03 血清白蛋白是一种重要的运输蛋白，其与许多内源性化 如下：配制一系列药物标准溶液(溶剂为1：l的甲醇一缓冲溶 合物和外源化台物的结合作用已有较广泛的研究，但迄今对 液)，测定吸光度并绘标准工作曲线。将未知浓度的药物溶液 其与中草药有效成分的作用研究还很少，尤其是具有生理活 稀释配制成和标准液完全一致的溶剂条件，测吸光度．由标准 性且难溶解于水的化合物。有报道“．在pH加．O的条件下 工作曲线即可确定药物浓度。 研究了蒽醌及黄酮类化合物与牛血清白蛋白的结合作用，此 1．3光谱测定 条件下，药物溶解度增大，但是与生理条件(pH7．4)有一定的 将1．07×10。4n】Dl·L_。．1．01×10。4mol·L1和1．08× 差别，且此时自蛋白构象也有一定变化。本文采用一种新的 10叫nd-L。1的丹参酮ⅡA，隐丹参酮和槲皮素与白蛋白混合 体系一口一环糊精(o．0lrrd·L叫)、磷酸钠(0．1mol·L-1)、氯(浓度比为l：1)．20℃反应数小时至完全平衡，测定吸收光 化钠(0．1rrd·I，1)的缓冲体系，在pH7．4条件下对难溶于 谱，并同时测定相应各浓度的药物的吸收光谱。用药物进行 水的丹参酮ⅡA等化台物与HsA相互作用进行了研究。 荧光滴定时，移取3rnL3．95×10n”1·L。1}E认于Icm比 色皿中，用微量进样器逐次滴加药物，固定激发渡长2踟r皿， 1实验 记录295～500rlrll的发射峰强度。 1．1试剂和仪嚣 2结果与讨论 人血清白蛋白(Si即m，美国)，丹参酮ⅡA，隐丹参酮(本 研究室自提”。)，槲皮紊(分析纯，经重结晶)，其他试剂均为分 2．1吸收光谱 丹参酮ⅡA等药物与HsA结合后，可见区最大吸收波长 析纯；uv一365紫外一可见分光光度计(岛津)，Ls50B荧光光 nm红 谱仪。 均发生红移．且吸收强度增加，其中丹参酮ⅡA由452 1．2实验缓冲体系及药物浓度的确定 移至458mn。隐丹参酮由437m1红移至456r衄，槲皮素由 在pH7．4时．在水溶液中丹参酮ⅡA等药物溶解度极 342r吼红移至349nrn。这表明这些药物均与HsA发生了相 小，不易采用荧光滴定法来研究与白蛋白的相互作用。口一环 互作用．且结合部位的极性小于外部水溶液”I。 期精(口cD)存在一个立体手性疏水腔，可以有选择性地包含2．2丹参酮ⅡA等药物对礤A荧光的猝灭效应 多种客体分子，形成超分子化台物，使许多水溶性差的药物形 丹参酮ⅡA等药物滴定}珏认过程中，HsA的荧