不经培养的农田土壤微生物种群构成及系统分类的初步研究.pdfVIP

卷 期 ! ! 微 生 物 学 报 %’ (! . (! 年 月 ## $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ )*+*,- ## !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 不经培养的农田土壤微生物种群构成 及系统分类的初步研究 陈 灏 唐小树 林 洁 张伯生 任大明 （复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室 上海 ##!33 ） 摘 要：采用一系列的现代分子生物学技术，避开传统的分离培养过程，探讨自然界中微生物 种群的基因多样性。经过直接从土壤中抽提总5.)，并对总5.) 中/67 85.) %3 可变区序列 作9:; 扩增、变性梯度凝胶电泳等，对农田土壤微生物种类分布进行初步的研究，发现不同 的农田土壤间的菌种差异相当显著，同时对部分农田微生物的系统分类作了初步尝试，为农 田土壤微生态和高效菌肥的研究提供了新的实验依据。 关键词：不经培养，微生态，系统进化 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） 03$ ) ###/46#0 ## #!4#!1$4#6 越来越多的证据显示可在实验室培养的菌种仅占自然界中细菌种类的极小部分，还 有相当多的菌种因为无法培养而未被人类所认识，而它们所包含的极大量的遗传基因是 ［］ 一笔无法估量的财富。不经过传统培养，直接从土壤中抽取总5.) / ，并进行分子生物学 分析来研究土壤微生物种群情况，是近几年逐步发展起来的全新实验手段。通过这种实 验技术，可以有效地避免在传统富集，培养，分离，研究过程中造成的微生物多样性丢 ［］ 失 ，种群构成发生变化等弊病，能够更直接更可靠的反映土壤微生物的原始组成情况。 实验中采集了几种种植不同农作物的农田土壤，分别抽取其中的微生物总5.) 后， 通过9:; 及变性梯度凝胶电泳获得了各种农田土壤中微生物 /6, 85.) %3 序列的分布， 对其中部分序列进行测序和生物信息学研究以后，对农田微生物分布做了初步研究。 ! 材料和方法 ! ! 材料 土壤样品：土样 ：农田旁未耕种土壤；土样 ：小麦育种田土壤；土样 ：蔬菜育种 ! ! ! / 3 田土壤；土样! ：玉米育种田土壤，这四份土样均采自上海农业科学院，采样距离不超过 。土样 ：棉花农田土壤，土样 ：毛豆农田土壤，这两份土壤采自安徽省当涂县江心 =# = 6 乡，采样距离不超过 。土样 ：青菜农田土壤，土样 ：茄子农田土壤，这两份土样采 /## 1 $ 自安徽省当涂县城关镇五一村，采样距离不超过=#。 ［］ = 其他材料及试剂：纯化试剂盒购自上海华舜生物工程有限公司， 引物 （ ! !# 9:; 9 =? ， :@:::@::@:@:@:@@:@@@:@@@@:@@@@@:):@@@@@@::A):@@@)@@:)@:)@4