动物细胞融合和单克隆抗体13390.ppt

学习目标: 1.了解动物细胞融合的原理、过程和意义 2.举例说出单克隆抗体制备的原理和应用 模拟单克隆抗体的制备过程 4人一组使用一套细胞 模型，完成模拟制备流程。 结合同位素的单抗 单克隆抗体的制备 * 叶 琴 专题2 细胞工程 2.2.2 动物细胞融合和单克隆抗体 重点：单克隆抗体的制备过程 难点：单克隆抗体的制备过程 2002年12月30日， 两场筹备了10年的“太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞“新人”—黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新人同时在 “产房”—电融合仪内孕育新生命。 “太空婚礼” 这两场“太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技术 植物体细胞杂交技术 动物细胞融合技术 实例1：自然条件 受精作用 一.动物细胞融合 1970年人工条件下的人-鼠细胞融合实验 实例2：人工诱导 １动物细胞融合过程 思考：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？ 2.概念： 3.结果： 杂交细胞 4.原理： 细胞膜的流动性 6.意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体 7.应用： 5.诱导方法： 物理法;化学法和生物法 活动1：请同学们快速阅读课本P52 动物细胞融合也称________ 。是指_________ 动物细胞结合成一个细胞的过程。 形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的 ____ 细胞，称为 ________ 。 两个 多个 或 单核 细胞杂交 处理方法 诱导手段 结果 原理 二、单克隆抗体的制备 1.图中是哪种免疫类型是？ ２.抗体由何种细胞产生？ ３.抗体主要分布在哪里？ ４.传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？ 温故知新 浆细胞 主要在血清 体液免疫 反复注射 浆细胞 抗原 动物体内 抗体 产量低、纯度低,特异性差,反应不够灵敏 活动２:阅读P５３找一找： 科学家发现B淋巴细胞有什么特点？ 并讨论：怎样才能获得大量的单一抗体？ 体外培养时，一个B淋巴细胞不能无限增殖 问题１：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的 问题２：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力 和无限增殖能力同时具备 科学家发现：１.体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上 　　　　　　　２.每个B细胞只分泌一种特异性的抗体 单 克 隆 抗 体 克隆 一个 B淋巴细胞 细胞群 抗体 癌细胞 动物细胞融合 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 杂交细胞 动物细胞培养 １.实验原理： 动物细胞融合 单克隆抗体 既能迅速大量增殖， 又能产生专一抗体 1975年，米尔斯坦和柯勒 1984年，诺贝尔生理学或医学奖 杂交瘤细胞 注射 羊红细胞 ２.单克隆抗体的制备过程 ．．．．．． 抗羊红细胞的单克隆抗体 活动３： 第一步：从一只小鼠体内提取T淋巴细胞，然后与骨髓瘤细胞诱导融合。 第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。 第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破伤风杆菌单克隆抗体。 已注入过灭活破伤风杆菌的小鼠 B淋巴细胞 选择培养基 必须经过克隆化培养和专一抗体检验阳性 1.下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。 小结 [变式练习]２.如图为细胞融合的简略过程，请据图回答： ⑴ 若A、B是植物细胞，在细胞融合之前用 　　　　　处　　理，除去了 　　 ；A、B到细胞C的过程中，常用的化学 　方法是用　　　　　　　诱导．　　　 ⑵ 若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用 　　技术把 D 培养成植株。 ⑶ 若A、B是动物细胞，一般用 　　　　 ，使其分散开来，A、B到 C 的过程中，常用的不同于植物细胞的诱导因素是 　　 ，所形成的D称为 　　　。 ⑷ 若该过程是制备单克隆抗体，A为B淋巴 细胞，在获得此细胞之前，小鼠已被注射 了 　　。在A、B到C的过程中， 所形成的 C 有 种，用来培养的D细胞 应该是 　　　 。 纤维素酶和果胶酶 细胞壁 聚乙二醇 植物组织培养 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 灭活的病毒 杂交细胞