培养基的配置.ppt

* * 实验一 培养基的配制 1、了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基的配制原理。 2、学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。 3、掌握压力蒸汽灭菌方法的原理和方法步骤。 实验目的 培养基(culture medium)是指人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生积累代谢产物的营养基质。 自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不同种类的培养基一般都应含有微生物生长所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养要素，且各成分比例应合适。 为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基合适的pH。 实验原理 培养基按成分可分为天然培养基（如麦芽汁培养基）、合成培养基（如高氏一号培养基、察氏培养基）和半合成培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯葡萄糖培养基）。 按物理状态可分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为1.5%-2%；半固体培养基琼脂加量为0.5%-0.8%。 培养基还可按用途划分，通常分为基本培养基、富集培养基、选择培养基、鉴别培养基等。 实验原理 (continued) 牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁培养基等都是常用的培养基。 牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；高氏一号培养基用于培养放线菌；麦芽汁培养基和豆芽汁培养基通常用于酵母菌的培养；马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。 实验原理 (continued) 实验分组安排 L1 ： 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 500ml ?斜面20支，余装三角瓶 L2 ： 高氏一号培养基 500ml ?斜面20支，余装三角瓶 R1 ： 马铃薯葡萄糖培养基 500ml ?斜面20支，余装三角瓶 R2 ： 豆芽汁培养基 500ml ?斜面20支，余装三角瓶 牛肉膏蛋白胨 培养基配方： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g 水 1000ml pH 7.4-7.6 高氏一号 培养基配方： 可溶性淀粉 20g NaCl 0.5g KNO3 1g 1g K2HPO4·3H2O 0.5g MgSO4·7H2O 0.5g FeSO4·7H2O 0.01g 琼脂 15-20g 水 1000ml pH 7.4-7.6 马铃薯 培养基配方： 马铃薯 200g 蔗糖（或葡萄糖） 20g 琼脂 15-20g 水 1000ml pH 自然 配法： 马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后纱布过滤取汁，再加入糖和琼脂，溶化后补足水分。 豆芽汁 培养基配方： 黄豆芽 100g 蔗糖（或葡萄糖） 50g 琼脂 15-20g 水 1000ml pH 自然 配法： 豆芽加水煮沸半小时，然后过滤取汁，再加入糖和琼脂，溶化后补足水分。 1、称量及溶化 2、调pH 3、加琼脂、溶化、定容、（过滤） 4、分装、加塞、包扎 5、灭菌 6、摆斜面 操作步骤 称量与溶化： 注意： 1）牛肉膏的称取：用玻璃棒蘸取适量牛肉膏，抹于称量纸上，勿取过量，不足时，再蘸取少量，逐步添加；然后将牛肉膏连同称量纸放入水中，稍等片刻牛肉膏即从称量纸上脱落，用玻璃棒将纸捞出即可。 2）可溶性淀粉应先用少量冷水调成稀糊状，再加入量杯的热水中。 操作步骤 (continued) 加琼脂、溶化、定容、（过滤） ? 琼脂一般应在调好了pH后加入，琼脂的加入不会影响培养基的pH。 ? 琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化，否则易出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过软，另外部分则琼脂过多。 ? 加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积减小，应补充水分至所需量。 ? 可趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察；如无特殊要求，通常可省略该步。 操作步骤 (con