水红花子不同提取物对人肝癌细胞Bel-7402增殖抑制作用的研究.pdfVIP

V01．20No．6 中国中医药科技2013年11月第20卷第6期Nov．2013 水红花子不同提取物对人肝癌细胞 Bel一7402增殖抑制作用的研究木 陈红淑1 冯耀荣2童晔玲3余美荣4李昌煜4△ (1浙江中医药大学附属第一医院·杭州3100062浙江省新华医院·杭州310005 3浙江省中医药研究院·杭州3100074浙江中医药大学·杭州310053) 摘要 目的：观察水红花子不同提取物对人肝癌细胞Bel一7402生长的抑制作用，筛选其有效作用部 位。方法：采用系统溶剂法制备水红花子不同提取物，MTr法观察水红花子不同浓度的各提取物对人肝 癌细胞Bel一7402增殖的的抑制作用；通过光学显微镜、透射电镜观察凋亡细胞的形态学及超微结构的 改变。并用流式细胞仪检测其乙酸乙酯提取物对该细胞周期分布及凋亡的影响。结果：水红花子石油醚、 乙酸乙酯和正丁醇提取物对人肝癌细胞Bel一7402均有一定的抑制作用，其中乙酸乙酯提取物抑制作用 最明显，呈现较好的剂量一效应曲线；流式细胞仪检测发现水红花子乙酸乙酯提取物可阻滞Bel一7402 细胞周期于G0／G1期，诱导肿瘤细胞凋亡。结论：水红花子乙酸乙酯提取物可能是其抗肝癌作用的有效 部位之一。 主题词水红花子／药理学Bel一7402／药物作用Bel一7402／超微结构体外研究 水红花子为蓼科植物红蓼尸奶，go，啪I碱，抛如urIrL的 型低速离心机：北京医用离心机厂；uR一4100型酶标仪：美 干燥成熟果实，性平，味甘，入肝、胃、脾三经，有化痞散结、清 热止痛功效。从国内外研究文献看，蓼属植物已分离出的化 养板与培养瓶：丹麦NuNCLoN公司。 合物主要包括：黄酮类、二苯乙烯类、葱醒类、木脂素等，其中 2方法 黄酮类和二苯乙烯类化合物具有很好的抗肿瘤作用¨。3】。 2．1 水红花子不同提取物的制备精密称取干燥的水红花 本实验拟采用系统溶剂法制备水红花子不同提取物，观察其 子2009，适度粉碎，以95％乙醇浸泡24小时，提取液减压浓 对体外培养的人肝癌细胞Bel一7402增殖的影响，初步明确 缩，回收乙醇后浓缩液依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃 其抗肝癌作用的有效部位及可能机制，为临床治疗和新药研 取，醇提后药渣以水煎提取，得到相应提取物，浓缩至浸膏， 发提供实验依据。 置减压干燥箱60‘C干燥至无溶剂残留。临用时分别精密称 1材料 取相应提取物2nlg，溶解于200山二甲基亚砜中，旋涡震荡， 1．1 实验药物水红花子：购自华东医药股份有限公司，产 待全部溶解后，加入800—RPMI一1640培养液，旋涡震荡混 地为吉林，经浙江省中医院徐锡山主任药师鉴定，以符合 匀，离心，过滤除菌，其终浓度均为2mg／d，置4℃冰箱保存 中国药典(20lO年版)要求者为合格品。5一氟尿嘧啶(5 备用。 一Fu)：江苏南通精华制药有限公司，批号：111210。 2．2 Bel一7402细胞增殖抑制率检测M-I．r法。 1．2细胞株人肝癌细胞株Bel一7402：购自中国科学院上 取对数生长期细胞，以肚’MI一1“0培养液稀释至浓度 海细胞生物学研究所。 约1×104·Ⅱll～，接种于96孔板，每孔200出，常规培养24 1．3主要试剂超级新生牛血清：杭州四季青生物工程材 小时后，分别加入10、15、20、25止各提取物，同时设溶剂空 料研究所；ItIMI一1640：美国GIBc0BRL公司；M