造血干细胞移植后巨细胞病毒药敏检测及UL97基因突变分析.pdfVIP

J South Med Univ, 2014, 34(4): 519-522 doi 10.3969/j.issn. 1673-4254.2014.04.17 ·519 · 基础研究 造血干细胞移植后巨细胞病毒药敏检测及造血干细胞移植后巨细胞病毒药敏检测及ULUL9797基因突变分析基因突变分析 1 1 1 1 1 2 曾爱红 ，董德坤 ，崔喜梅 ，郭明明 ，邹德志 ，方建培 1 2 中山大学附属一院急诊科，广东 广州 510080；中山大学附属孙逸仙纪念医院儿科，广东 广州 510120 摘要：目的通过表型和基因型分析方法，初步了解造血干细胞移植术后巨细胞病毒（HCMV）感染患儿的耐药情况。方法采用 人包皮成纤维细胞培养分离并鉴定HCMV 临床株；Reed.Muench 法测定其半数组织培养感染量（TCID50 ），空斑减数实验测定 病毒对丙氧鸟苷的敏感性，同时以HCMV UL97基因为靶序列，用 Nested-PCR扩增目的基因，并对 PCR产物做直接序列测 定 。结果 成功从患者尿标本中分离出 HCMV 临床病毒株，测得其TCID 为：10-4.618/0.1 ml；IC 值为 5.847 µmol/L，对丙氧鸟 50 50 苷高度敏感；同时基因序列与AD169株的序列相比较，发现四个位点发生碱基突变，分别是 1509 T→C、1575 C→T、1794 T→ C、1815 C→G ；上述突变的编码子分别为503，525、598 和605，前 3 个位点的突变未导致相应氨基酸改变，第四个位点氨基酸 则改变为D605E，未发现与耐药有关的基因突变。结论 初步建立造血干细胞移植后HCMV耐药表型和基因型检测的实验方 法，本次试验从临床标本中尚未发现HCMV耐药现象。 关键词：人巨细胞病毒；耐药；丙氧鸟苷；基因突变 Drug susceptibility and UL97 gene mutation analysis of cytomegalovirus in recipients of hemato-poietic stem cell transplantation 1 1 1 1 1 2 ZENG Aihong , DONG Dekun , CUI Ximei , GUO Mingming , ZOU Dezhi , FANG Jianpei 1Department of Emergency Medicine, First Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510080, China; 2Department of Pediatrics, Second Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510120, China Abstract: Objective To monitor human cytomegalovirus (HCMV) drug resistance in recipients of hematopoietic stem cell transplantation by phenotypic and genotypic methods. Methods HCMV clinical isolates was isolated from the urine of hematopoietic stem cell transplantation recipients treated with GCV. Tissue cell infection median dose (TCID50) of the isolates was