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微生物限度检查解读 蔡美明 2005.11 一、前言 1. 规定了微生物限度检查的定义及检查内容。 2. 实验的环境设施及操作的无菌要求。 3. 对检查中使用的助溶剂、中和剂、灭活剂的作用及对微生物生长和存活的影响应进行验证 4. 霉菌培养温度改为23~28℃，控制菌培养温度改为以35~37℃表示，细菌不变。 5. 增加检验结果的单位：10g，10ml。 二、具体内容 1. 检验量： 指明了检验量是一次试验所用的量；对贵重药、微量包装药可酌减，但不规定3g或5g；因沙门菌检查的报告单位为10g或10ml，所以检验量应另增10g或10ml（不含阳性对照用量）。 2. 供试液制备（与2000年版药典相比的不同点） 3. 细菌、霉菌、酵母菌计数 3.1平皿法： 3.1.1平皿法两版药典比较 3.1.2平皿法菌数报告规则 3.1.3平皿法其他内容，如阴性对照试验等等与2000年版相同 3. 细菌、霉菌、酵母菌计数（续） 3.2薄膜过滤法(为2005年版药典新增内容) 3.2.1操作 3.2.2阴性对照试验 3.2.3培养和计数 3.2.4菌数报告规则 3.1.1平皿法两版药典比较 3.1.1平皿法两版药典比较（续） 3.1.2平皿法菌数报告规则 2000年版药典存在许多不足，2005年版作了较大改动 1) 规定取两位有效数字报告。在计数及中间计算过程中可多保留一位。 2) 2005年版中： （1）与2000版相同 3.1.2平皿法菌数报告规则 (续) （2）当比值≤2时，与2000年版相同，以两级均数报告 当比值2时，规则与2000年版不同，如比值为2~5时，说明两级之间存在较大差别，应以低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数 增加了比值大于5，或出现高稀释级菌数大于或等于低稀释级，应查明原因。如试液有较强的抑菌作用，就不能象上述一样忽略，必须调整方法 3.1.2平皿法菌数报告规则(续) （3）与2000年版相同 （4）与2000年版相同 3.1.2平皿法菌数报告规则(续) 3) 还删除了2000年版中不合理的3条;把培养基稀释列为具抑菌活性供试品在任何情况下通用的方法，不仅仅局限于某种情况,而且方法也进行了合理的调整，取样改为2ml，每1 ml所注平皿多个(不定) 3.2薄膜过滤法 (为2005年版药典新增内容) 3.2.1操作： 1）取相当于供试品1g（ml）的供试液[如取供试品1g（ml）或1：10供试液10 ml或1：100供试液100 ml]，加至适量稀释剂 ，混匀，过滤 2）冲洗方法、冲洗液、冲洗量（应验证） 3）每种培养基至少制备一张膜 3.2薄膜过滤法(续) 3.2.2阴性对照试验: 等同于“空白试验”，即不加供试品，按同法操作所得结果，每种培养基均需做。 3.2薄膜过滤法(续) 3.2.3培养和计数: 与平皿法相同。但每张滤膜上菌数应不得过100个，如果超过100个，也就是每1g（ml）供试品含菌量较多，可取适宜稀释级供试品1ml检查，例如，1：10取10ml检查，菌落150个（150个/g），则改用1：10取1ml检查，菌落为15个（150个/g） 3.2薄膜过滤法(续) 3.2.4菌数报告规则: 1) 报告每1g（ml）供试品菌落数； 2) 若膜上无菌落生长时，如果（每张膜过滤1g(ml)供试品或1：10×10ml供试液，如每张膜过滤1：10×10ml供试液，则报告10个，依此类推，为1乘以稀释倍数 4. 控制菌检查 1) 大肠菌基本相同，主要修改是：当MUG和靛基质两项中有一项为阳性时，大肠菌的进一步确认通过大肠菌菌落形态特征比较进行鉴别排除，增加大肠菌形态特征，对进一步确认做什么生化试验不作硬性规定（是否妥？），所以原有的生化试验结果判断删除了。 4. 控制菌检查(续) 2) 增加大肠菌群检查。 3) 沙门、金葡、绿脓也和大肠菌一样作了调整，大同小异。沙门菌规定取供试品1 0 g（ml），另加阳性对照10 g（ml）。 4) 增加了梭菌检查（无论试管或平皿都要注意厌氧条件培养）。 5. 微生物限度标准 （略） 主要变化是由按剂型控制改为按给药途径控制。 6. 方法验证 6.1细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证： 1) 菌液制备（略） 2) 验证方法：主要分四组，测得四组数据。 ①供试品对照组：按拟定的菌落计数方法，准确测定规定量(与试验组的相同)的供试液中的菌落数，得供试品的已知含菌数----相当于已知供试品的含量。 ②菌液组：测定所加的试验菌的菌数----相当于精密称定对照品，得对照品的已知加入量。 6. 方法验证(续) ③试验组（操作略）：取已知含菌数的供试液（试验可能用的最低稀释级供试液1ml）和一定量的试验菌，进行测定。测得试验组的总菌量，测定两份（两个平