人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发.pptVIP

三、实验方法与结果 人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发 学 院：生命科学学院 专 业：生物工程 报 告 人：段海婷 一、简介 人绒毛膜促性腺激素(HCG)是孕卵着床后由人体滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素，它是由α和β二聚体的糖蛋白组成，α亚基与垂体分泌的FSH（卵泡刺激素）、LH（黄体生成素）和TSH（促甲状腺激素）等基本相似，而β-HCG是HCG所特有的，HCG的含量变化已成为检测是否妊娠的重要依据。 市面上销售的HCG试纸被大家所熟悉，然而它只适用于一般人群，本试纸灵敏度进一步提高，也可适用于不易检测的人群。 二、检测原理 以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用金聚集呈现红色，检测抗原，检测结果一般有阴性和阳性。 试纸条主体示意图 试纸条阳性示意图 试纸条阴性示意图 金的选择 金标抗体的制备 试纸材料的选择 试纸条膜抗体的固定 试纸条的组装 试纸条的测试 1.金的选择 金在整个检测过程中起示踪的作用，其质量的好坏直接影响试纸的检测结果。 制备金一般使用的方法是用还原剂将氯金酸还原，制备金，其制备方法较多，本实验应用两种制备金的方法：柠檬酸钠法（水相）和硼氢化钠法（有机相）。 柠檬酸钠法 柠檬酸钠法制备的金在1-100纳米之间，能均一稳定的分散在液体中，由一个基础金核和外面的双离子层构成，分散溶液中的H+ 构成金的最外层离子层，在金核表面紧连的是内层离子（AuCl2-），来维持金的悬液状态。 硼氢化钠法 以硼氢化钠做还原剂，甲苯做溶剂，通过还原氯金酸制备得到金纳米粒子。这时金颗粒表面由十二硫醇做配位保护，巯基配位结合在金颗粒表面，碳链留在外面，此时的金纳米颗粒是疏水的。 两亲聚合物是既有疏水基团又有亲水基团的齿状聚合物，其通过疏水作用包裹在金纳米颗粒表面，从而使金纳米颗粒由有机相转移到水相。 柠檬酸钠法制备金的表征 　　　 水相金溶液晶莹透亮，无混浊，色泽鲜艳，呈酒红色， 没有漂浮物。水相金粒径18.16nm，水相金最大吸收峰在520nm时吸收值是0.41。 硼氢化钠法制备金的表征 上图的金成黑紫色，不浑浊，没有悬浮物，粒径为20.5nm，最大吸收峰在517nm时吸收值是0.19。 两种制金方法的对比结果 上图蓝色线是水相金紫外可见分光光度检测结果，粉色线是有机相相金紫外可见分光光度检测结果。两种方法制备出来的金颗粒粒径基本一致，两种方法最大的不同就是柠檬酸钠还原法制备的金的吸收值Abs在最高峰及最高峰之前一直偏大，这说明，柠檬酸钠还原法制备的金浓度大，更适合本实验后面金标抗体的制备。 2.金标抗体制备 金标抗体即金和抗体大分子结合物，金在碱性条件下带负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团借静电吸引而形成牢固结合，不会影响蛋白质活性。 左边的最大吸收峰在277nm处，是没有结合的抗体蛋白；右边的最大吸收峰在527nm，比原来的520nm大，说明金结合了抗体蛋白，体积变大。 3.试纸材料的选择 把羊抗鼠二抗固定到A，B，C三种不同孔径的硝酸纤维素膜试纸同一位置处，将其37℃干燥后，在硝酸纤维素膜试纸的一端滴加金标抗体溶液，比较液体流速、是否会产生背景色，以及羊抗鼠二抗与金标抗体的结合效果。 A B B B C C