病理组织学诊断检材制备技术.docVIP

病理组织学诊断检材的制备技术 一、组织的固定 ㈠凡需要进行病理组织学检查的标本（器官或组织），于离体（活体或尸体）后，应尽快置放（浸 泡）于装有足够量固定液的容器中固定。固定液量应为被固定标本体积的 5~10倍。置放标本的 容器大小视标本和固定液的体积而定，应适当大一些。临床科室切取的标本置放于容器中固定后， 应尽快送交病理科继续固定。未能及时、充分固定的干涸或腐败标本不能再进行固定和用于制做 切片。 ㈡常规固定液为 4%中性甲醛（10%中性福尔马林），应预先多量配制贮存，以备随时使用。小 标本的固定时间为 4~6 小时，大标本为 18~24小时或更久。 ㈢根据病理学特殊检查（特殊染色和组织化学染色、免疫组织化学染色和原位核酸分子杂交染色、 16电镜观察等）的需要，应选用其他适宜的固定液进行固定［参见后述的“㈦固定液的常用种类和 制备”］。 ㈣器官、组织固定的基本方法 ［另参见本章第四节（病理标本的肉眼检查和组织学切片取材技术）］ 1．食管、胃、肠、胆囊、膀胱等空腔器官：依规范方法剪开后，按其自然状态平铺于硬纸板上 （重点暴露黏膜面或内表面的病变处），并用大头针将标本边缘处固定于纸板上，然后放入 4% 中性甲醛中固定（黏膜面或内表面朝向容器的液面，并覆盖薄层脱脂棉）。 2．肝、脾：由器官背面，沿其长轴每间隔 1.5~2.0cm纵向平行剖开，切成数片。将每片肝或脾 轻轻地平放于装有 4%中性甲醛的容器中，容器底面衬以脱脂棉。应避免标本弯曲和相互间的叠 压。 3．肺叶：放入固定液中的肺叶漂浮于液面，需在肺表面覆盖薄层脱脂棉。必要时从支气管注入 适量 4%中性甲醛。 4．肾：沿肾外缘中线朝肾门方向作一水平切面（深达于肾盏），再行固定。 5．淋巴结：先用 4%中性甲醛固定 1小时后，再沿其长轴切成数片（厚 2 ~3mm），继续固定。 6．骨组织：先锯成小片（若是长骨应作横向锯片） ，在 4%中性甲醛中固定 24 小时后，再进行 脱钙。 7．微小组织或液体沉淀物：先用拭纸或滤纸妥为包裹（需用大头针扎牢），然后放入专用小盒 内进行中性 4%甲醛固定，以防检材遗失。 8．凡进入固定程序的标本必须连带其正确无误的病理检验号（病理号）。 ㈤多数固定液对人体有害，需要防护，必须在封闭的通风条件下进行操作。 ㈥组织块的切取和固定：①由较大标本切取用于制作切片的组织块（取材）时，应与标本的断面 平行，组织块厚度一般为 0.3 cm(不应0.5cm)，面积一般在 1~1.5×1~1.5以内。②切取组织块 的形状，在充分包括肉眼病变的前提下尽量规则些（例如方形、矩形、三角形等）；由一个标本 切取的多块组织的形状有所不同，便于蜡块与其相应切片的核对。 ③固定组织块的固定液量， 一般应为组织块总体积的 5~10倍以上。④室内常温（25℃左右）下的固定时间为 3~24小时； 低温（4℃）下的固定时间应延长。⑤固定组织块的容器要大一些。⑥组织块固定期间需要间断 地轻摇或搅动固定液以利于固定液的渗入。 ㈦常用固定液 1．4%中性甲醛（10%中性福尔马林）固定液 甲醛（40%） 100 ml 无水磷酸氢二钠 6.5g 磷酸二氢钠 4.0g 蒸馏水 900ml 2．乙醇－甲醛（酒精－福尔马林，AF）固定液 甲醛（40%） 100ml 95%乙醇 900ml ［说明］一般组织块经乙醇－甲醛固定 1～2小时后，即可移入 95%乙醇内脱水。 3．Carnoy 固定液 无水乙醇 60ml 氯仿 30ml 冰醋酸 10ml ［说明］组织化学染色的常用固定液，组织经 Carnoy 液固定 1～2 小时后，即可移入无水乙醇 中脱水。 4．Zenker 固定液 17升汞 5.0g 重铬酸钾 2.5g 硫酸钠 1.0g 蒸馏水（加至） 100ml ［说明］配制本液时，先将升汞溶于蒸馏水中、加温至 40～50℃溶解后，再加入重铬酸钾，最 后加入硫酸钠，贮存待用。使用前加入 5ml 冰醋酸，混合。组织块需固定 12~24小时。切片染 色前，需进行脱汞沉淀处理。 5．Bouin 固定液 饱和苦味酸水溶液（约 1.22%） 75ml 甲醛（40%） 25ml 冰醋酸 5ml ［说明］本液临用时配制。组织块置于 Bouin 液固定 12～24小时即可（小块组织只需固定数小 时） 。经