艾滋病检测方法及进展.pdf

艾滋病的检测方法及进展 军事医学科学院微生物流行病研究所 司炳银 形态结构 人类免疫缺陷病毒直径约120纳米，大致呈球形。 病毒外膜是类脂包膜，来自宿主细胞，并嵌有病毒的蛋 白gp120与gp41；gp41是跨膜蛋白，gp120位于表面，并 与gp41通过非共价作用结合。向内是由蛋白p17形成的球 形基质，以及蛋白p24形成的半锥形核衣壳。核衣壳内含 有病毒的RNA基因组、逆转录酶、整合酶、蛋白酶，以及 其他来自宿主细胞的成分。 主要特点 1、主要攻击人体的T淋巴细胞系统。 2、一旦侵入机体细胞，病毒将会和细胞整合在一 起终生难以消除。 3、病毒基因变化多样。 4 、广泛存在于感染者的血液、精液、阴道分泌物 、唾液、尿液、乳汁、脑脊液、有神经症状的 脑组织液，其中以血液、精液、阴道分泌物中 浓度最高。 5、对外界环境的抵抗力较弱，对乙肝病毒有效的 消毒方法对艾滋病病毒消毒也有效。 6、感染者潜伏期长，死亡率高。 7、艾滋病病毒的基因组比已知任何一种病毒基因 都复杂。 HIV感染的实验室检测方法 常用HIV病原学检测方法: 1. 核酸检测 （cDNA测定-PCR、RNA测定-病毒载量） 2. 病毒培养分离 3. P24抗原检测 常用HIV抗体检测方法: 初筛：1.酶联免疫吸附法ELISA ：第三代、第四代 2.快速检测RT ：金标、硒标 3.简单法PA: 明胶颗粒凝集 确证：免疫印迹法WB: （Western Blot）、RIBA 其他相关检测方法: 免疫功能测定：CD4/CD8检测 （一）HIV核酸检测 1. HIV核酸定性检测：通常使用PCR RT-PCR技术，用于HIV感染的辅助诊断。 2. HIV核酸定量检测：使用实时荧光定量 PCR, NASBA, bDNA等技术，常用于监测 HIV感染者的病程进展和抗病毒治疗效果。 核酸检测特点： ①能够用于常规不能培养和分离的病毒的检测 （如HBV、HCV、 HIV等）； ②仅需少量标本或标本中仅含少量病毒也能检测； ③在病毒感染的急性期抗体尚未出现之前，病毒感染的诊断主 要依靠NAT，适用于早期诊断； ④可对病毒进行定量检测，有助于疗效监测； ⑤可对病毒基因进行基因分型，比血清分型更有价值； ⑥通过对病毒耐药基因的检测，可预测或发现病毒的耐药性； ⑦可用于先天性或围产期获得性病毒感染的诊断； ⑧灵敏度高 （可达ng甚至fg 水平，理论上能检出单个病毒基 因），特异性好、快速、简捷。 PCR反应图解 。 定量NASBA技术： 是由一对引物引导的，连续的、均一的、体外核苷 酸等温扩增的酶促反应。 优点：操作十分简单，只需将制备好的模板直接加 到反应体系中，恒温41 ℃扩增1.5～2小时，即可将模板 9 扩增10 倍。 NASBA 反应体系包括AMV 反转录酶、RNA 酶H、 T7RNA聚合酶、核糖核苷三磷酸、脱氧核糖核苷三磷酸 两个特异的引物及适宜的缓冲液。 NASBA的反应分为两相：循环相和非循环相。 bDNA信号扩增技术 主要包括分枝DNA检测 （branched DNA assays ）和杂交捕获检测 （hybrid capture assays ）。 检测时病原模板并不扩增，而是通 过对检测信号的放大来实现对病毒核酸 的检测和定量。 （二）HIV抗体检测 检测抗-HIV抗体是HIV/AIDS诊断的一项