猪胞内劳森氏菌GXNN株4个抗原性候选基因抗原性分析.pdfVIP

广西农业科学 2010，41(1)：62—65 GuangxiAgriculturalSciences 猪胞内劳森氏菌GXNN株4个抗原性 候选基因抗原性分析 肖爱欢 ，谢丽华 ，廖承球 ，兰家暖 ，李茂宁 ，侯韶毅 ，陆仕勇。，黄伟坚 (1广西大学动物科学技术学院，南宁 530005；2梧州市动物疫病预防控制中心，广西梧州 543002 3广西农垦国有金光农场，南宁 530042) 摘要：参考GenBank上已发表的胞内劳森氏菌相关蛋白序列，设计了4对引物，分别扩增了4个抗原性候选基因(3 个外膜蛋白基因和1个表面脂蛋白基因)，并将4个抗原性候选基因构建好原核表达载体后进行原核表达、SDS—PAGE 电泳和Westernblotting分析。SDS—PAGE电泳检测初步确定重组融合蛋1~pET32a—L10902、pET32a—LI1022能够进行表 达，分别得到53、37kDa的条带；Westernblotting~}析则初步确定pET32a—LI1022具有抗原性。研究结果首次验证胞内劳 森氏菌外膜蛋白基因是否具有抗原性 ，为诊断试剂盒及基因工程疫苗的研制提供理论基础。 关键词：胞内劳森氏菌；抗原性；候选基因；SDS—PAGE电泳；Westernblotting；猪 中图分类号：$858．28 文献标识码：A 文章编号：1002—8161(2010)01—0062—04 An‘al’ysis‘otnanti··~eni…cityi●nt一ouranti··genic‘cand1l●datJegenesotn Lawsoniaintracell~arisGXNN strain XIAOAi-huan，XIELi-hua，LIAOCheng-qiu，LAN Jia-nuan，LIMao-ning，H0U Shao-yi，LUShi-yong，HUANGWei-jian (1CollegeofAnimalScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China；2WuzhouPreventionand ContmlCenterofAnimalEpidemicDisease，Wuzhou，Guangxi543002，China；3GuangxiJinguangStateFarm， Nanning530402，China) Abstract：Accordingtotheassociatedprotein sequencesofLawsoniaintracellularispubhshed in GenBank，four paim ofprimersweredesignedandthegenesofthreeoutermembraneproteinsandoneectal lipoproteinwereamplified． Afterconstructingtheprokaryotieexpressionvectorsforfourantigeniccandidategenes，theprokaryoticexpression，SDS- PAGE eleetrophoresisandWestem blottinganalysiswere performed．Theresultsshowedthattworecombinationfusionpro teinspET32a—LIO902andpET32a—LI1022couldbeexpressedand57kDaand37kDabnadWas obtainedbySDS—PAGE electrophoresis．respectively．I11eWestern blottinganalysisresultsshowedhtatpET32a-LI1022hadantigenicity．Thesere— suitsofrthefi