脂多糖经MyD88-NF-κB信号途径抑制Bewo细胞中乙型肝炎病毒复制.pdfVIP

脂多糖经MyD88/NF-κB信号途径抑制Bewo细胞中 乙型肝炎病毒复制 资捷 王前 郑磊 熊石龙 王芳 [摘要] 目的 探讨Toll样受体4(TLR4)配体脂多糖(LPS)抑制人滋养层细胞Bewo中乙型肝 炎病毒(HBV)复制的作用机制，为防治HBV宫内感染提供依据。方法 首先将2μg1.3倍HBV全 基因重组质粒pcDNA3.1(+)-HBV1.3转染Bewo细胞12h后，以TLR4配体LPS处理3d。尔后用 LPS处理Bewo细胞，观察IFN-β、TNF-α表达的动力学、NF-κB拮抗剂二硫代氨基甲酸吡咯烷 (PDTC)对LPS诱导Bewo细胞产生细胞因子的作用。采用微粒子酶免疫分析法(MEIA)和荧光定量 PCR法分别检测HBsAg、HBeAg和HBVDNA水平，并以ELISA和RT-PCR分别检测IFN-β、TNF-α水 平及TIR结构域的转接蛋白(TRIF)、髓样分化蛋白(MyD88)表达。结果 与对照组比较，LPS可显 著抑制Bewo细胞中HBV复制(P＜0.01)，且LPS可显著诱导Bewo细胞产生TNF-α(P＜0.05)，呈 时间和剂量依赖性。PDTC可抑制LPS诱导细胞产生TNF-α，显著低于对照组(P＜0.01)，但对IFN- β无显著作用(P＞0.05)。与对照组比较，LPS可诱导HBV重组质粒转染的Bewo细胞表达MyD88 (P＜0.01)。结论 通过MyD88/NF-κB信号途径诱导Bewo细胞产生TNF-α，TLR4配体LPS可显 著抑制HBV复制。 [关键词] 脂多糖类/药理学；髓样分化因子88/代谢；NF-κB/代谢；肝炎病毒，乙型/药物作 用/代谢；病毒复制/药物作用；信号传导 LPS-mediatedinhibitionhepatitisBvirusreplicationinBewocellsviatheNF-κB/MyD88pathway ZIJie WANGQianZHENGLei XIONGShi-long WANGFang ShenzhenFutianWomenand ChildrenHealthCareHospital,Shenzhen518045,China Objective ToexploretheeffectandmechanismofToll-likereceptor4(TLR4)ligand LPS-mediatedinhibitionhepatitisBvirus(HBV)replicationinBewocells.Methods Firstofall,2μg 1.3-foldHBVrecombinantvectorpcDNA3.1(+)-HBV1.3weretransfectedintoBewocells,after12h, thecellsweretreatedwithLPSfor3d.ToobservethekineticsofIFN-βandTNF-αexpressioninBewo cells,theBewocellswereexposedtoTLR4ligandLPS.Andtheeffectofpyrrolidinedithiocarbamate (PDTC),aninhibitorofNF-κB,onLPS-inducedcytokineswasalsoobserved.TheHBsAg,HBeAgand HBVDNAlevelintheculturesupernatantweredetectedbyMicroparticleEnzymeImmunoassay(MEIA) andfluorescencequantitativePCR,respectively,andtheexpressionofIFN-β,TNF-α,TRIFandMyD88 wasdetectedbyELISAandRT-PCR,respectively.Results Comparedwithcontrolgroup,LPScouldsig nificantlysuppressHBVreplicationinBewocells(P＜0.01),anditcouldinducetheproductionofTNF α inBewocells(P＜ 0.05),intime-anddose-dependentmanners.PDTCstronglyinhibitedLPSandin ducedTNF-αproduction,buthadnomucheffectonIFN-β inBewocells(P＜0.001).Comparedwith controlgroup,themRNAlevels