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实验七 厌氧性细菌 (anaerobic bacteria) 录像：无芽胞厌氧菌的感染 示教： 破伤风梭菌及产气荚膜梭菌的形态．染色性及培养特性 Nagler反应 无芽胞厌氧菌的形态 （脆弱类杆菌．消化链球菌） 厌氧培养方法 操作： 产气荚膜梭菌致病性试验 肠道致病菌粪便标本的分离与鉴定（续）血清学反应 肠道致病菌粪便标本的分离与鉴定（续）血清学反应 * 厌氧菌 G+有芽胞 无芽胞 破伤风梭菌 产气荚膜梭菌 肉毒梭菌 艰难梭菌 G+ G- 双歧杆菌 消化链球菌 脆弱类杆菌 韦荣菌属 破伤风梭菌(C.tetani)革兰染色涂片： 菌体细长，芽胞正圆，比菌体粗，位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状。 破伤风梭菌电镜图 形 态 产气荚膜梭菌(C.perfringens)革兰染色涂片： 菌体粗大，两端几乎平切。芽胞呈椭圆形，位于次极端，不大于菌体，体外很少形成芽胞。 产气荚膜梭菌荚膜(体内易形成)： 培 养 特 性 分解乳糖产酸，指示剂变黄，培养基凝固,产生大量气体,呈蜂窝状,将液面凡士林上推,甚至冲走管口棉筛。 无明显改变 紫牛奶培养基 分解肉渣中糖类而产生大量气体。 菌落平整，光滑，边缘齐。有双层溶血环：内层完全溶血(θ 毒素引起)，外层不完全溶血(α 毒素引起) 产气荚膜梭菌 肉汤混浊，肉渣部分被消化，呈灰白色 37℃ 48h，薄膜状爬行生长物，边缘不齐，伴轻度β 溶血 破伤风梭菌 庖肉培养基 血平板 Clostridium perfringens shows stormy fermentation of litmus milk. Acid turns the pH indicator litmus from blue to pink, acid and enzymes coagulate the proteins in the milk, and gas tears the curds apart. 汹涌发酵： stormy fermentation Nagler 反应 产气荚膜梭菌产生卵磷脂酶(α毒素)，在蛋黄琼脂平板上，卵磷脂酶分解蛋黄中的卵磷脂，生成的甘油二酯在菌落周围形成乳白色混浊圈。当加入相应抗毒素后，卵磷脂酶活性丧失，菌落周围不出现混浊圈。 产气荚膜梭菌致病性试验 培养液注入小鼠腹腔→ 断颈处死 → 剖腹→肝脏印片→石炭酸复红负染 染色 涂片→自然干燥 →染液 →迅速水洗 →印干 →油镜检 37℃ 5-8h 厌氧培养方法 1.物理法：厌氧箱或厌氧缸。用物理方法将氧气吸走，充入氮气、二氧化碳、氢气。 2.化学法：氢气+氧气 水 3生物法：厌氧菌与需氧菌一起放入密闭空间培养。 钯 标本 选择鉴别培养基 (SS平板) 生化反应 血清学鉴定 双糖管等 37℃ 24h 已知Ab检测未知Ag (玻片凝集试验) *
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