生物素放大酶联免疫方法检测氯霉素残留.pdf

摘要 本文对兽药氯霉素的传统酶联免疫分析方法进行了改进，将生物素亲和素放大系 统引入酶联免疫检测方法中，建立了氯霉素生物素放大酶联免疫(BA．ELISA)检测 O．05“∥L，最低检测限(ICl5)为O．05士O．01p∥L，板问变异及板内变异系数低于19．7％。 对于直接BA．ELISA方法，首先制备出了高效的生物素化抗体，经反应条件的优化， 方法灵敏度IC50为O．37士0．04蚓L，最低检测限(ICl5)为O．03士O．006p∥L，板间变 异及板内变异系数低于14．0％。对两种生物素方法从检测限、灵敏度、变异系数及检 测所用时间等多方面进行比较，最终选择直接BA．ELISA方法用于实际样品的检测。 迸一步将所建立的直接BA-ELISA方法应用于动物源性食品，包括牛奶、猪肉和 鱼肉样品中氯霉素残留的快速检测，对样品的前处理方法进行详细的考察和筛选，优 化出基质干扰程度小、处理过程简单快速的方法。分别对氯霉素在三种实际样品中的 添加回收率进行测定，回收率在86％．1lO％之间，可满足残留检测方法对检测灵敏度 的要求，也可满足快速筛选的需要。采用液相色谱法对建立的氯霉素生物素放大酶联 免疫检测方法的准确性进行了验证。两种方法检测结果的一致性很高，线性相关系数 R2值达0．9706，证明了所建立的直接BA-ELISA方法的准确度及可靠性。 关键词：氯霉素；生物素亲和素放大系统；酶联免疫检测 ABSTRACT IIl廿lis s饥sitive immullosorb∞t pap％a bio缸n-s仃ep协，idin觚lplifiedenzyme-liIll(cd fornledet锄inationof w嬲developed 懿say(BA—ELISA)meⅡlod residu鹤．The syStem to豇lIlanceⅡle TWofo姗ats biotin-s仃印ta访dinw鹤印plied sensitivity ofBA．ELISAme吐lodwercs伽ied．Thevalueandlimitof IC50 tlleindirectBA—ELISA向rCAPwereⅡlememodallowedCAPdetenrlination 鹤ICl5)of winlvalueof0．46士0．05 Thevariation p∥L锄dO．05士0．01肛∥L，respectiVcly we∞allbelowl the BA-ELISA coe伍Cientsof 9．7％．Fordirect iIl仃a-鹪say锄dinte卜assay antibodi鹤was methodallowcdnleCAP prepared，柚d也e metllo也廿赡biotiIlylated det锄iIlationwim valuc alimitofdetectionof0．03士O．006 IC50 of0．37士O．04肛∥L锄d Vari撕oncoe伍cientsof we佗allbelowl4．0％．AfI盯 p∥L．The in仃a·鹪say锄d缸昏器say metwomethods矗)r廿lelimitof direct 00mpads∞of detection’se璐itiⅥ坝趾dCVs，me