草鱼2株气单胞菌的分离与鉴定.pdfVIP

第32卷第6期 水产 科 学 V01．32No．6 SCIENCE 2013年6月 FISHERIES Jun．2013 草鱼2株气单胞菌的分离与鉴定 隗黎丽，王自蕊，杨竹青 (江西农业大学动物科学技术学院，江西南昌330045) 摘要：自患病草鱼鳃和肝胰脏内分离到2株致病菌株，人工回归感染试验显示分离的菌株可使草鱼 发病死亡，对分离菌株进行细胞形态学、理化特性分析，初步判定所分离的2株菌为气单胞菌，进一步 16S 对菌株的16SrDNA基因序列分析发现，菌株J)【GC20121rDNA与GenBank中嗜水气单胞菌的相 16S 似性为98％，菌株JXGC20122rDNA与维氏气单胞菌相似性为97％，表明JXGC20121和 JXGC20122分别为嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌。测试了2株细菌对10种常用抗菌药的药敏性，分 离菌株对丁大胺卡那霉素、复方新诺明和氯霉素高度敏感，对环丙氟哌酸、诺氟沙星等呈现较强的耐 药性。 关键词：草鱼；嗜水气单胞茵；维氏气单胞菌；16SrDNA；药敏试验 中图分类号：S965．112 文献标识码：A 文章编号：1003-1111(2013)06-0348—05 idella)作为我国重再用接种环蘸取鳃丝和肝胰脏上的黏液在普通琼 草鱼(Ctenopharyngodon 要的淡水鱼类养殖品种，具有生长快、饲料蛋白需 脂平板上划线后。28℃培养24--48h，待平板上长 求低、肉质好等优点。随着养殖密度的增大和养殖 出形态一致的优势菌落后，挑选单个优势菌落再次 环境的恶化，在养殖过程中极易受到各种病原的侵 划线分离，直到获得纯培养菌株。 袭，其中细菌性病原尤为严重。因此，分离并鉴定 1．3人工感染试验 草鱼细菌性疾病的病原对草鱼病害的有效防治具 将分离得到的两株菌分别接种于普通肉汤培养 有比较重要的意义。在本研究中，笔者自江西南昌 基中，在28℃下恒温培养24h，取100mL细菌培养 患病草鱼鳃、肝胰脏分离纯化出2株病原菌，经回 液，7500r／min离心i0min，沉淀用灭菌磷酸盐缓冲 液(o．1 归感染试验证实了所分立菌株为致病菌株。结合 mol／L，pH7．2)清洗一次，然后再用 rDNA基因序列分析方法鉴0．1 7．2)重悬制成菌悬液， 传统的生理生化和16S tool／L磷酸盐缓冲液(pH 定了所分离的致病病原菌，并开展了药物敏感性分 稀释成1×108du／mL进行腹腔注射，每尾鱼注射0．1 析，以期为控制与预防草鱼的细菌性疾病提供切实 mL，对照组注射等量的磷酸盐缓冲液，感染组和对照 有效的治疗方法和可靠的试验数据。 组分别注射10尾鱼。连续观察7d，记录鱼的发病症 状和死亡数。 1材料与方法 1．4病原菌鉴定 1．1材料 1．4．1病原形态观察 发病草鱼，取自江西南昌市郊区某养殖场，体长 取纯化后的细菌在普通琼脂培养基上28℃培 10