微生态制剂培养技术—正交法与研究光合细菌混合培养.docVIP

微生态制剂培养技术—正交法研究光合细菌的混合培养 摘 要 利用光合细菌和蜡样芽孢杆菌协同生长的特点进行混菌培养试验。蜡样芽孢杆菌好氧， 光合细菌兼性厌氧，通过两种细菌的不同添加比例，寻找一种最好的添加比例，使光合细菌活菌数在最短的时间内达到最大值。试验过程中，采用正交试验对两种菌的比例进行了科学的组合，从而找到两种菌的最佳配比：在光合细菌 1%或 5%、芽孢杆菌 1%的添加量的情况下，可以在最短的时间内使光合细菌菌数达到理想值。 关键词 光合细菌；混菌培养；正交法 近年来, 随着生活水平的提高, 人们对畜禽产品 质量的要求越来越高, 绿色食品越来越受到消费者的 青睐。因光合细菌营养丰富, 提高畜禽免疫力方面效 果显著, 而且在水产养殖方面, 能净化水质, 提供一部 分活性氧, 所以很多研究者对其尤为重视 [1-3] 。但因为 光合细菌培养周期长, 菌数很难达到人们要求, 所以, 研究者采用各种方法进行了光合细菌混菌培养试验 的研究。Giraud E Z 和 Fleischman D(2004)研究发现, 当光合细菌与根瘤菌共同培养时,可增强根瘤菌抗干 扰能力, 储藏的时间更长,在豆科植物上能形成更有 效的根瘤,从而增加植物的产量 [4] 。李勤生等(1998)采 用光合细菌不同菌株、光合细菌菌株与异养菌株混合 培养, 试验结果发现, 不同组合的混合培养物其生长 量均不同程度的高于单株培养物, 最高增长量高达 17.4%,最低也高于对照组 [5] 。 本试验是在光合细菌单菌培养的基础上, 进行了光 合细菌和芽孢杆菌的混菌培养, 目的就是提高光合细菌 的生长速度, 缩短培养周期, 增加光合细菌的活菌数。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌种 光合细菌(9.0×10 8 CFU/ml)和蜡样芽孢杆菌(1.0× 10 9 CFU/ml)均由本实验室分离、筛选、鉴定、保存。 1.1.2 培养基 光合细菌富集培养基 乙酸钠 3.0 g、丙酸钠 0.3 g、NaCl 1.0 g、(NH 4 ) 2 SO 4 0.3 g、MgSO 4 0.2 g、KH 2 PO 4 0.5 g、K 2 HSO 4 0.3 g、CaCl 2 50 mg、MnSO 4 2.5 mg、FeSO 4 5 mg、酵母膏 0.l g、蛋白胨 10 mg、谷氨酸 0.2 mg、H 2 O 1 000 ml, 将以上组分溶于水 后调 pH 值为 7.4, 然后在 121.0 ℃蒸汽灭菌 30 min。 芽孢杆菌肉汤培养 牛肉膏 5.0g、蛋白胨 10.0 g、NaCl 5.0 g、H 2 O1 000 ml, pH 值 7.4～7.6, 121.0 ℃下蒸汽灭菌 30 min。 芽孢杆菌平板普通培养基 在肉汤培养基的基础之上, 加入琼脂 1.0%,121.0 ℃ 下蒸汽灭菌 30 min。 光合细菌计数培养基 NaHCO 3 1.0 g、CH 3 COONa 3.0 g、 酵 母 膏 2.0 g、 K 2 HPO 4 0.5 g、Fe-EDTA0.005 g、NH 4 Cl 1.0 g、MgCl 2 ·6H 2 O 0.2 g、NaCl 5.0 g、H 2 O 1 000 ml, pH 值 7.4～7.6、121.0 ℃ 下蒸汽灭菌 30 min。 1.1.3 仪器 微量加样器、平板、1 ml 移液管、漩涡振荡器、试 管等。 1.2 培养方式和条件 1.2.1 蜡样芽孢杆菌摇床培养 用接种环刮取斜面保存的蜡样芽孢杆菌, 平板划 线, 进行活化, 37 ℃培养 24 h。使用灭菌的 250 ml 三 角瓶装芽孢杆菌肉汤培养基 30～40 ml, 从平板上刮取 菌落, 接种到肉汤培养基上, 37 ℃、130 r/min 摇床培 养 24 h。 1.2.2 光合细菌富集培养 [6] 使用光合细菌富集培养基, 在温度 28℃, 光照 60W, 光源距离培养物 10～20 cm, 光照强度大约在 600～ 1 900 LX之间。选择 1 000 ml 的三角瓶, 装入 1 000 ml 光合细菌富集培养基, 按不同比例接菌, 使用封口膜 封口, 然后光照培养 6～8 d, 观察颜色变化。颜色黑红 色时保存, 供混菌培养使用。 试 验 研 究 《 饲料工业》·2007 年第 28 卷第 4 期 311.2.3 光合细菌和蜡样芽孢杆菌混合培养 光合细菌富集培养基分装于消毒后的 200 ml 三 角瓶中, 接种时采用光合细菌与蜡样芽孢杆菌同时接 种, 其中光合细菌 1%、5%、10%、20% 4 个水平, 而蜡 样芽孢杆菌采用 0.1%、0.5%、1%、2% 4 个水平, 用正 交组合法接种, 然后按光合细菌富集培养条件进行光 照培养。每隔 24 h 采样一次, 进行光合