阿魏酸酯酶基因工程菌发酵条件优化.pdfVIP

第 28卷 第2期 齐 鲁 工 业 大 学 学 报 Vol_28 No．2 2014正 5月 JOURNAL OF QILU UNIVERSITY 0F TECHNOLOGY Mav． 2014 文章编号：1004—4280(2014)02—0021—03 阿魏酸酯酶基因工程菌发酵条件优化 徐振上，刘 盼，杨晓颖 (齐鲁工业大学食品与生物工程学院，山东 济南250353) 摘要 ：以本实验室前期构建的重组大肠杆菌工程菌株为基础 ，为提高阿魏酸酯酶的表达量，通过试验设计，对工程 菌株 目的蛋白可溶表达条件进行优化。实验采用250mL三角瓶中，内含50mL(Amp100mg／L)的LB培养基，分 别研究诱导温度、诱导物 IPTG浓度、诱导时机和诱导时间等对蛋白可溶表达量的影响。确定了阿魏酸酯酶工程菌 可溶性表达最优条件为：过夜培养菌体以1：100比例接种新鲜培养基，摇床转速200rmp／min，在37℃下培养至 0D鲫值为 1．0时，添加终浓度为0．01mM的IPTG进行诱导 ，诱导温度30℃，诱导时长为9h，最终单位发酵液的酶 活力为400U／L。以上数据为阿魏酸酯酶重组工程菌的工业应用奠定 了基础。 关键词 ：阿魏酸酯酶 ；基因工程菌；条件优化 中图分类号：Q939．6 文献标识码 ：A Optimization onfermentation condition ofgenetic engineeringbacteriaofferuloylesterase XUZhen—shang，LIU Pan，YANG Xiao-ying (SchoolofFoodandBioengineering，QiluUniversityofTechnology，Jinan250353，China) Abstract：On thebasisoftherecombinantE．colistrainswhichwerebuiltinourlaboratory，in orderto improve the expression levelofferuloylesterase，the conditionsof soluble protein expression were optimizedthroughexperimentaldesign．Using250mLErlenmeyerflaskcontaining50mL(Amp100mg／L) medium，inductiontemperature，inducerconcentration，induced expression ofsolubleprotein timingand inductiontimewerestudied．Identifiedferuloylesteraseengineeredbacteriaoptimalconditionsforsoluble expressionwereincubatedat37 ℃ toOD600valueof1．0．addingafinalconcentrationof0．OlmM of IPTG，inductiontemperature30 oC ，shakingspeed200rmp／min，inoculum of1％ ，whiletheinduction time9h．Afterthefermentation400U／Lenzymeactivitywasobtained．Theabovedatamakeabasisofr therecombinantengineeringbacteriapilotfermentation． Keywords：feruloylesterase；geneticengineeringbacteria；optimization 降解和木质素的释放 ]，因此在食品、饲料和造纸 0 引言