HE4融合蛋白基因的构建、表达及鉴定.pdfVIP

国实验诊断学 2010年 1月 第 l4眷 第 — 期 文章编号：1007—4287(2010)01—0017—03 HE4融合蛋 白基因的构建、表达及鉴定 卢仁泉 ，胡 娟 ，吴兴中 ，郭 林 (1．复旦大学附属肿瘤医院 检验科、复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海200032； 2．复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系) 摘要：目的 重组及表达人附睾上皮分泌蛋白4(HE4)的融合蛋白，为建立一种新的卵巢癌的诊断方法奠定基础。 方法 提取人卵巢 细胞株SKOV3中总 1LNA，应用 RT-PCR技术扩增出HE4基因，将其与PUCm—T载体连接，转化入 qX)PIO菌中进行克隆并测序鉴定。进一步构建PEI28a—HFA表达体系，用异丙基．D一硫代半乳糖苷 (Im )诱导 ，最终 在BL21菌中表达 HE4融合蛋白(含有 His—Tag)，并进行 SDS及 westernblot鉴定。结果 SKOV3细胞株提取的 RNA经RT-PCR扩增后得到一条4O0bp左右的DNA片断，经测序鉴定含HE4基因序列；成功构建了HFA融合蛋 白的